HPLC測定覆盆子中金絲桃苷的含量
【摘要】 目的 建立覆盆子中金絲桃苷的含量測定方法。方法 采用HPLC法。SinoChrom ODS BP色譜柱（5µm，4.6×250mm），流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15:85），檢測波長：360nm。結果 金絲桃苷濃度線性范圍0.00506~0.1012mg/ mL，r =0.99994；樣品平均回收率為98.77%，RSD=1.57%（n=6）。結論 該方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可用于該中藥的含量測定。
【關鍵詞】覆盆子 金絲桃苷 HPLC 藥學
【Abstract】 Objective To establish a method to determine Hyperin in Rubi Fructus.Methods A HPLC method was used. Chromatographic assay was performed on a SinoChrom ODS BP(5µm，4.6×250mm）column.The mobile phrase consisted of acetonitile-0.1% phosphoric（15:85）,the detection wavelength was set at 360nm.Results The linear range of Hyperin was from 0.00506 to 0.1012mg/ mL and correlation coefficient was 0.99994.The average recovery of Hyperin was 98.77% and RSD was 1.57 %（n=6）.Conclusion The method is simple ,accurate and reproducible for the determination of Hyperin in Rubi Fructus.
【Key words】 Rubi Fructus Hyperin HPLC
覆盆子為薔薇科植物華東覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果實，有益腎固精縮尿、養(yǎng)肝明目的功效，用于治療遺精滑精，遺尿尿頻，陽痿早泄，目暗昏花。覆盆子果實中含有三萜類成分，覆盆子酸，鞣花酸，椴樹苷，胡蘿卜苷[1]，另有文獻報道，尚含黃酮化合物[2,3]。由于覆盆子基礎研究薄弱，2010年版《中國藥典（一部）》中僅有性狀鑒別和顯微鑒別[4]。目前已有椴樹苷的HPLC含測方法報道[5]，但尚無覆盆子中的金絲桃苷定量測定的文獻。本實驗采用HPLC法對其進行了含量測定，結果表明，該方法快速簡捷、重現(xiàn)性好，取得了滿意的結果。
1 實驗部分
1.1 儀器與試藥
HP-Agilent1100型高效液相色譜儀，包括G1322A真空脫氣機，G1311A四元泵，G1313A自動進樣器，G1365A多波長檢測器，LGC-1025M柱溫箱，HP Rev.A.07.01色譜工作站；BP211D型1/10萬電子分析天平（德國Sartorius公司）；250超聲波清洗器（上海）。
金絲桃苷對照品（供含測用，中國藥品生物制品檢定所提供，批號：111521-200303）。乙腈（色譜純，美國Tedia公司），水為重蒸水，其余試劑均為分析純。
覆盆子Rubi Fructus，經(jīng)鑒定為薔薇科植物華東覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果實。
1.2 方法與結果
1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性考察[6]
色譜柱：SinoChrom ODS BP（5µm，4.6×250mm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15:85）；流速：1mL/min；檢測波長：360nm；柱溫：30℃；進樣量：10µL；理論板數(shù)按金絲桃苷峰計算應不低于5000。
1-金絲桃苷 1-Hyperin
圖1 對照品（A）和樣品（B）的色譜圖
Fig.1 Chromatograms of reference substance（A）and sample（B）
1.2.2 對照品溶液的制備
精密稱取金絲桃苷對照品10.12mg，置100mL量瓶中，加80%甲醇使溶解并定容至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密吸取2mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
1.2.3 供試品溶液的制備[6]
取本品粉末（過四號篩）1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250w，頻率40kHz）1小時，放冷，再稱定重量，加80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
1.2.4 線性關系考察
精密吸取“1.2.2” 項制備的對照品貯備液0.5，1，2，3，5，10mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液10µL，按“1.2.1”項色譜條件測定，以進樣濃度為橫坐標（X：mg/mL），峰面積積分值為縱坐標（Y ：mAU*s），進行線性回歸，得回歸方程：Y = 208.3 1X - 0.0134，r = 0.999 94。結果表明，金絲桃苷在0.00506~0.1012mg/mL的范圍內呈良好線性關系。
1.2.5 精密度試驗
精密吸取“1.2.2”項下制備的對照品溶液10µL，重復進樣6次，測定峰面積，結果RSD=0.22%，表明本法精密度良好。
取供試品溶液于制備后0、2、4、6、8、10h進樣，金絲桃苷峰面積的RSD=0.59%，表明供試品溶液在10h內穩(wěn)定。
1.2.7 重復性試驗
稱取同一批樣品6份，按“1.2.3”項下方法處理并測定含量，結果金絲桃苷RSD=1.17%，表明此方法重復性較好。
1.2.8 回收率試驗
稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入一定量的對照品，按“1.2.3”項下方法處理并測定含量，分別計算樣品加樣回收率（結果見表1），平均回收率為98.77%，RSD=1.57%。
表1 金絲桃苷回收率試驗結果
2 討論與總結
2.1 流動相的選擇
本實驗通過對乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液等多種不同比例的流動相進行比較試驗，結果乙腈-0.1%磷酸溶液比例為15:85的系統(tǒng)分離效果較好，且峰形較好，故選擇本系統(tǒng)為流動相。
2.2 含量測定的討論
本實驗中1.2.9樣品的含量測定中第二批的含量和其它兩批含量差異較顯著，分析原因可能與覆盆子來源不同有關系，因此，仍需做大量實驗來驗證。
2.3 含量與功效的關系
本實驗確定了覆盆子中的黃酮類化合物為金絲桃苷，但是金絲桃苷含量的高低與覆盆子的功效之間的聯(lián)系仍不明確，還有待進一步研究。
參考文獻
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[2] 苗菊茹，謝一輝，劉紅寧．覆盆子的研究進展[J]．江西中醫(yī)藥，2004,1,1
[3] 劉勁松，王剛，王國凱．覆盆子化學成分研究[J]．中國中醫(yī)藥科技，2008,5, 15( 3): 197-199
[4] 中國藥典[S]．一部，2010,359
[5] 虞金寶，呂武清，彭宏俊等．覆盆子中椴樹苷的含量測定研究[J]．藥物研究，2008,17(23):8-9
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