槲寄生抗腫瘤作用研究
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摘要槲寄生提取物作為天然的抗癌藥物在歐洲被應(yīng)用已有幾十年，近幾年來人們發(fā)現(xiàn)其抗腫瘤活性成分主要是槲寄生凝集素、毒肽、生物堿，本文就其抗腫瘤作用做一綜述。
論文關(guān)鍵詞：槲寄生,凝集素,毒肽,生物堿,抗腫瘤作用
槲寄生（Viscum coloratum(Kom.)Nakai）為桑寄生科槲寄生屬植物，是一種半寄生植物，常寄生于榆樹、槲樹等樹上，其莖、葉入藥。槲寄生化學(xué)成份主要包括三萜類、黃酮類、多糖、植物凝集素、槲寄生毒素、生物堿等。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為槲寄生有祛風(fēng)濕，補肝腎，強筋骨，養(yǎng)血、安胎等功效，中醫(yī)用來治療風(fēng)濕痹痛，腰膝酸軟，胎動不安等癥狀[1,2]。近年來，有關(guān)槲寄生抗腫瘤作用的報道增多，其抗腫瘤活性成分主要為植物凝集素、槲寄生毒肽、生物堿。本文就植物凝集素、槲寄生毒肽、生物堿抗腫瘤作用的研究進(jìn)行綜述。
1凝集素的抗腫瘤作用
槲寄生凝集素（mistletoe lectin,ML）是一種糖蛋白，能夠識別細(xì)胞膜表面糖蛋白的糖鏈，由A鏈和B鏈兩個亞基組成。它的B鏈與細(xì)胞表面受體末端的半乳糖結(jié)合，然后經(jīng)細(xì)胞的二硫鍵裂解系統(tǒng),將A 鏈釋放,經(jīng)胞飲作用使A 鏈進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),A 鏈與60S 核糖體亞基中的28SRNA 結(jié)合,并斷裂糖苷鍵,使60S 核糖體不能與延伸因子EF-2反應(yīng),致使蛋白質(zhì)合成停止,細(xì)胞死亡[3]。
1.1凝集素種類及特性
目前從歐洲槲寄生中分離得到三種植物凝集素(ML)，ML-Ⅰ，ML-Ⅱ，ML-Ⅲ。三類ML具有同源的氨基酸序列。Blonski等[4]發(fā)現(xiàn)ML與惡性腫瘤細(xì)胞表面的糖配體結(jié)合率高達(dá)92.5%，因而其亦可作為其他抗腫瘤藥物的靶向性運載工具。
1.2凝集素抗腫瘤機制
1.2.1抑制腫瘤細(xì)胞增殖 Kovacs 等[5]發(fā)現(xiàn)ML可以抑制骨髓瘤細(xì)胞RPMI-8226增殖，其有效劑量范圍為5-20ng/106/ml。傅煒昕等[6]研究ML對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用，結(jié)果顯示ML注射液影響細(xì)胞周期的作用環(huán)節(jié)是阻滯細(xì)胞周期中S期的細(xì)胞進(jìn)入G2+M期,導(dǎo)致G1期細(xì)胞百分比下降,從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖。
1.2.2誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 ML可誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡，Kim等[7]研究了ML對肝癌Hep3B細(xì)胞凋亡的作用，發(fā)現(xiàn)其是通過誘導(dǎo)產(chǎn)生活性氧（ROS）和下調(diào)線粒體膜電位使Hep3B細(xì)胞凋亡的。其中，SEK1/JNK1信號途徑起了關(guān)鍵作用。ML-1（VAA-1）可通過Caspases途徑誘導(dǎo)PLB-985和X-CGD細(xì)胞凋亡，細(xì)胞學(xué)檢測出現(xiàn)明顯DNA“梯狀帶”，并發(fā)現(xiàn)細(xì)胞骨架蛋白降解，核纖層蛋白B1是其作用的靶點[8]。
1.2.3免役調(diào)節(jié)作用 Enesel等[9]給消化道腫瘤患者進(jìn)行術(shù)前和術(shù)后ML治療，與對照相比，發(fā)現(xiàn)ML能顯著減弱手術(shù)引起的免役抑制作用，并能增加NK細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞的數(shù)量及補體、IgG、IgA、IgM的含量。Huber等[10]通過外周血單核細(xì)胞(PBMC)研究了ML對人體免役力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PBMC和1類細(xì)胞因子如IFN-γ、TNF-γ，2類細(xì)胞因子IL-5、IL-3，單核巨噬細(xì)胞因子IL-1、TNF-α明顯增多。
1.2.4影響腫瘤血管生成 Elluru等[11]報道ML抗腫瘤的機制涉及腫瘤血管的生成。上皮細(xì)胞對腫瘤血管的形成具有重要的作用。Yan Huyen等[12]研究了ML對人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和永生性人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的作用，發(fā)現(xiàn)ML能誘導(dǎo)這兩種細(xì)胞凋亡。ML還能顯著降低小鼠非何杰金淋巴瘤內(nèi)毛細(xì)血管的數(shù)量，從而影響腫瘤生長[13]。
1.2.5抑制腫瘤復(fù)發(fā) ML用于表淺膀胱癌切除術(shù)后膀胱內(nèi)灌注治療，可降低膀胱癌的復(fù)發(fā)，且無明顯的局部或全身性反應(yīng)[14]。
1.2.6增強化療藥物的作用 Bantel等[15]研究發(fā)現(xiàn)ML作為輔助治療藥物可以增強拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑依托撲沙的抗癌作用。
1.2.7抑制端粒酶活性 ML能抑制人A253細(xì)胞端粒酶的活性，這也是其抗腫瘤機制之一[16]。Lyu等[17]檢測了肝癌SK-hep-1和Hep3B細(xì)胞在ML作用后端粒酶的活性，結(jié)果顯示ML以不依賴p53的方式抑制端粒酶的活性并呈時間相關(guān)性。
2槲寄生毒肽的抗腫瘤作用
槲寄生毒肽（viscotoxins，VT）是槲寄生中另一個重要的抗腫瘤活性成份，它們是一類相對分子量在5KDa左右的堿性多肽，含有46個氨基酸殘基，富含半胱氨酸[18]。這類多肽對多種類型細(xì)胞都有毒性，包括動物、細(xì)菌和真菌[19]。
2.1 槲寄生毒肽的種類和特性
槲寄生毒肽中已鑒定一級序列的有12種，來源于歐洲槲寄生的有6種：VT A1、A2、A3、B1、PS、U-PS；中國槲寄生中分離了6種：VT B2、B3、B4、B5、B7、B8，各種槲寄生毒肽一級序列高度保守[1]。槲寄生毒肽對多種腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性，毒肽分子通過破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)而產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，其破壞細(xì)胞膜的機制可能是：通過靜電力與膜磷脂酰絲氨酸頭部結(jié)合，使膜變得僵硬，出現(xiàn)功能障礙。如果結(jié)合進(jìn)一步增加則引起膜失穩(wěn)定化，膜雙分子層被破壞，導(dǎo)致膜內(nèi)容物外漏[20]。
2.2 槲寄生毒肽抗腫瘤機制
2.2.1抑制細(xì)胞增殖孔景臨等[21]用VT B2作用于大鼠成骨樣肉瘤細(xì)胞，顯示有明顯抑制作用，其IC50為1.6mg/L。
2.2.2免役調(diào)節(jié)作用 Klein等[22]用槲寄生提取物治療病人，在不同時間取血清做ELASE檢測，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了Ig型抗VT抗體,說明VT也具有免役調(diào)節(jié)作用。此外，Tabiasco 等[23]發(fā)現(xiàn)VT 還可以增強NK細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤作用。
3槲寄生生物堿的抗腫瘤作用
槲寄生生物堿是多種生物堿的混合物，因提取方法的不同而得到的生物堿所含種類不同。陳柏年等[24]報道用溶劑回流提取方法提取的槲寄生生物堿，經(jīng)薄層層析顯示至少含5種生物堿。而Park等[25]采用酸提堿沉有機溶劑萃取法提取的生物堿據(jù)色譜法分析顯示韓槲寄生中至少含10種生物堿�，F(xiàn)已證明槲寄生堿在體內(nèi)外對腫瘤都有殺傷作用。
3.1 體內(nèi)抗腫瘤作用陳世偉等[26]觀察了槲寄生堿對小鼠實體瘤生長及瘤性腹水小鼠生存壽命的影響，與對照相比，能明顯抑制腫瘤生長及延長小鼠壽命，有明顯量效關(guān)系。
3.2 體外抗腫瘤作用彭海燕等[27]采用MTT法測定了槲寄生堿對食管癌、乳腺癌細(xì)胞生長的抑制作用，結(jié)果在0.031mg/ml-0.125mg/ml劑量時,對2種細(xì)胞的抑制率分別為39.8﹪-67.0﹪和47.7﹪-70.2﹪。
槲寄生堿雖已顯示出顯著的抗腫瘤作用，但其作用的機制尚未見報道，有待進(jìn)一步研究。
近幾年來，國外對槲寄生的研究和開發(fā)進(jìn)展較快，歐洲槲寄生制劑已廣泛用于臨床并取得較好效果。專家預(yù)測槲寄生有望成為繼紫杉醇之后又一種天然抗癌藥物。我國槲寄生資源豐富，具有良好的開發(fā)前景。應(yīng)用現(xiàn)代的藥物和生物學(xué)技術(shù)，開發(fā)我國具有自主知識產(chǎn)權(quán)的藥物，對促進(jìn)我國中藥現(xiàn)代化發(fā)展具有重要意義。
