樹莓果油脂肪酸成分分析及其抗氧化活性研究
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楊永晶1，2，索有瑞1，3，韓麗娟1，2，常珊4
1．中國科學(xué)院西北高原生物研究所（西寧810001）；2．中國科學(xué)院大學(xué)研究生院（北京100049）；3．青海大學(xué)農(nóng)林科學(xué)院（西寧810001）；4．青�，幊厣锟萍加邢薰荆ê|810599）
摘要采用氣相色譜技術(shù)分析了樹莓果油的脂肪酸組成，并利用體外自由基清除試驗(yàn)評價(jià)了樹莓果油的抗氧化活性。結(jié)果表明，樹莓果油中主要含4種脂肪酸，其中飽和脂肪酸棕櫚酸占脂肪酸總量的0.66%，3種不飽和脂肪酸油酸、亞油酸和a-亞麻酸分別占脂肪酸總量的17.33%, 49.00%和33.01%。抗氧化活性研究表明，樹莓果油對ABTS自由基和DPPH自由基具有很強(qiáng)的清除能力，12 mg/m L的清除率分別高達(dá)96.49%和93.53%。此外，樹莓果油對超氧陰離
子和羥自由基也有一定的清除作用，12 mg/m L的清除率分別為49.89%和37.73%。試驗(yàn)結(jié)果為樹莓果油的進(jìn)一步開發(fā)與利用提供了理論基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞 樹莓果油；脂肪酸分析；抗氧化
樹莓（Rubus idaeus L．）為薔薇科懸鉤子屬植物，又名覆盆子、山莓、牛奶泡等，分布于北半球溫帶和寒帶。近年來，隨著廣泛的人工培育、引種和種植，目前已有上百個(gè)樹莓品種。樹莓果實(shí)為小聚合果，味甜微酸，可直接食用，也可加工成果醬、果汁、果酒等諸多產(chǎn)品。樹莓因其豐富的營養(yǎng)和良好的醫(yī)療保健作用，被譽(yù)為“黃金水果”。樹莓果實(shí)中含有大量的維生素、礦質(zhì)元素、蛋白質(zhì)、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)，還含有多糖、有機(jī)酸、黃酮、花青素、多酚、揮發(fā)油、鞣質(zhì)等多種生物活性成分。現(xiàn)代藥理研究表明，樹莓具有抗氧化、抗炎、抗血栓、抗癌、抗疲勞等多種活性。
近年來，對于樹莓果實(shí)的研究越來越多，主要包括樹莓果實(shí)中花青素、黃酮、酚類、鞣花酸等化合物的分離純化，結(jié)構(gòu)確證及活性評價(jià)，樹莓籽油的提取、分析及活性研究，樹莓多糖的提取、分析及活性研究等，但仍鮮見到樹莓果油的相關(guān)研究。鑒于此，試驗(yàn)采用氣相色譜技術(shù)分析了樹莓果油中的脂肪酸組成，并利用體外自由基清除試驗(yàn)評價(jià)了樹莓果油的抗氧化活性，為樹莓果油的進(jìn)一步開發(fā)與利用提供了理論基礎(chǔ)。
1 試驗(yàn)材料與儀器
1.1試驗(yàn)材料
樹莓冷凍果（品種：秋英Autumn Britten）：購自青�，幊厣锟萍加邢薰�。
1.2試劑
脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品：自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院；2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基一苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽( ABTS)、1，1-二苯基-2-苦肼基自由基( DPPH)：上海晶純生化科技股份有限公司；乙腈（色譜純）：天津市百世化工有限公司；石油醚（沸程60 ℃～90℃）、無水乙醇、正己烷、硫酸亞鐵、30%雙氧水、水楊酸、鄰苯三酚、過硫酸鉀：分析純，青海天順化學(xué)試劑公司。
1.3試驗(yàn)儀器與設(shè)備
DHG-9203A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海一恒科技有限公司；CLF-30B高速連續(xù)型超微粉碎機(jī)：浙江省溫嶺市創(chuàng)力藥材器械廠；ALC-110.4電子天平：ACCULAB; SCQ-6201C超聲清洗器：上海聲彥超聲波儀器有限公司；N-1200BT旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：EYELA；TD-RS-1渦旋混合儀：北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司；7890A氣相色譜：Agilent Technology; UPT-I -5T超純水機(jī)：成都超純科技有限公司；DZKW-D-4恒溫水浴鍋：河南鄭州南北儀器設(shè)備有限公司。
2試驗(yàn)方法
2.1樹莓果油的提取
將樹莓冷凍果置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中除去水分（溫度55℃）。用超微粉碎機(jī)粉碎樹莓干果（轉(zhuǎn)速22 000 r/min，時(shí)間1～2 s）后過80目篩網(wǎng)(孔徑0.2mm)，除去完好無損的樹莓籽，即得到樹莓果粉。稱取樹莓果粉30 g，置于三角錐形瓶中，加入石油醚，采用超聲提取法提取樹莓果油。提取條件如下：料液比1：30( g/m L)，超聲功率200 W，提取時(shí)間90min，溫度40℃，重復(fù)提取3次。合并樹莓果油提取液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于45℃進(jìn)行減壓濃縮，除去溶劑后即得到樹莓果油。
2.2樹莓果油脂肪酸含量測定
2.2.1脂肪酸的甲酯化
量取樹莓果油1mL，加入2 m L正己烷，1 m LKOH-甲醇混合液(2 mol/L)，充分振蕩并混勻。將混合溶液于60℃水浴30 min。樣品冷卻后加水至10m L，充分振蕩后于室溫靜置60 min。待分層后，取上清液進(jìn)樣。
2.2.2氣相色譜條件
色譜柱HP-88（60 m×250 μm×0.2μm）；進(jìn)樣量1v,L。升溫程序：初始溫度40℃，持續(xù)3 min，以40C/min升至120℃，再以8。C/min升至160℃，持續(xù)1min;以3℃/min升至181℃，持續(xù)10 min；以2℃／mm升至212℃，持續(xù)5 min；共運(yùn)行48.5 min。檢測器為FID，汽化溫度250℃，氫氣流量40 m L/min，空氣流量400 m L/min，尾吹流量19.5 m L／min。
2.3樹莓果油抗氧化活性測定
2.3.1樹莓果油ABTS自由基清除率的測定
3結(jié)果
3.1樹莓果油脂肪酸組成分析
圖1為脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜圖，由圖可見35種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品分離情況較好（脂肪酸甲酯準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品按照其出峰時(shí)間依次編號(hào)）。各脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品及保留時(shí)間見表1。
圖2為樹莓果油脂肪酸甲酯化產(chǎn)物的氣相色譜圖。通過與脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的對比，可以確定樹莓果油中主要含有4種脂肪酸，包括1種飽和脂肪酸3種不飽和脂肪酸。利用峰面積歸一化法計(jì)算各脂肪酸的百分含量，其中飽和脂肪酸棕櫚酸占脂肪酸總量的0.66%，3種不飽和脂肪酸油酸、亞油酸和a-亞麻酸分別占脂肪酸總量的17.33%，49.00%和
33.01%。樹莓果油中的不飽和脂肪酸含量占總脂肪酸的99.34%。
3.2樹莓果油的抗氧化作用
3.2.1樹莓果油對ABTS自由基的清除作用
如圖3所示，樹莓果油對ABTS自由基具有很強(qiáng)的清除作用，在濃度為0.045-3 mg/m L，其對ABTS自由基的清除作用隨濃度的增加而不斷增強(qiáng)；當(dāng)濃度達(dá)到6 mg/m L時(shí)，其對ABTS自由基的清除作用趨于穩(wěn)定。12 mg/m L的樹莓果油對ABTS自由基的清除率高達(dá)96.49%，相同濃度下的陽性對照(VC)對ABTS自由基的清除率為99.89%。
3.2.2樹莓果油對DPPH自由基的清除作用
圖4為樹莓果油對DPPH自由基的清除作用�？梢钥闯�，樹莓果油對DPPH自由基亦有很強(qiáng)的清除作用，其清除作用隨濃度的增加而持續(xù)增加。12 mg/mL的樹莓果油對DPPH自由基的清除率高達(dá)93.53%，相同濃度下的陽性對照( VC)對DPPH自由基的清除率為97.67%。
3.2.3樹莓果油對超氧陰離子的清除作用
由圖5可見，樹莓果油對超氧陰離子有明顯的清除作用，在濃度為0.09～0.375μ g/m L時(shí)，其對超氧陰離子的清除作用隨濃度增加而急劇增強(qiáng)；當(dāng)濃度超過0.375 μg/m L后其對超氧陰離子的清除作用隨濃度增加而緩慢增強(qiáng)。12 μg/m L的樹莓果油對超氧陰離子的清除率為49.89%，相同濃度下的陽性對照(VC)對超氧陰離子的清除率為99.85%。
3.2.4樹莓果油對羥自由基的清除作用
圖6為樹莓果油對羥自由基的清除作用。可見，樹莓果油對羥自由基有一定的清除作用，且其清除作用隨濃度的增加而不斷增強(qiáng)。12 mg/m L的樹莓果油對羥自由基的清除率為37.73%，相同濃度下的陽性對照( VC)對羥自由基的清除率為98.50%。
4結(jié)論
不飽和脂肪酸是人體不能合成而又必需的脂肪酸，必需從膳食中獲取，具有極為重要的生理功能。亞油酸是人體合成前列腺素的主要物質(zhì)，具有防止血栓形成和擴(kuò)張血管的作用，其還可以預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓和高血脂等疾病。亞麻酸是構(gòu)成人體組織細(xì)胞的主要成分，可轉(zhuǎn)化為人體必需的二十二碳六烯酸( DHA)和二十碳五烯酸(EPA)，具有提高免疫力、抗疲勞、補(bǔ)腦健腦、預(yù)防視力減退、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化等作用。研究利用氣相色譜分析了樹莓果油的脂肪酸組成，發(fā)現(xiàn)樹莓果油中含有大量的的不飽和脂肪酸，其含量占總脂肪酸的99.34%。其中，油酸、亞油酸和a-亞麻酸分別占脂肪酸總量的17.33%，49.00%和33.01%。與沙棘果油相比，樹莓果油中的不飽和脂肪酸含量更高。其中，亞油酸含量為沙棘果油的10.81倍（沙棘果油的亞油酸含量為4.53%），亞麻酸含量是沙棘果油的19.5倍（沙棘果油的亞麻酸含量為1.69%）。
自由基的化學(xué)性質(zhì)非常活潑，它能與生物體內(nèi)的諸多物質(zhì)大分子發(fā)生作用，進(jìn)而造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的破壞。自由基在多種病理過程中扮演著重要角色，如癌癥、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、組織損傷、衰老等。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，樹莓果油對ABTS自由基、DPPH自由基、超氧陰離子、羥自由基均具有良好的清除作用。其中，對ABTS和DPPH自由基的清除作用尤其強(qiáng)，幾乎與VC的作用相當(dāng)。說明樹莓果油具有極強(qiáng)的抗氧化活性。
綜上所述，樹莓果油可以作為優(yōu)質(zhì)食用油，具有極大地開發(fā)價(jià)值和應(yīng)用前景。
