關(guān)于NF—κB與早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期的相關(guān)分析
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子癇前期是妊娠期特有并發(fā)癥，嚴(yán)重影響母嬰健康，基本病理變化是全身小血管痙攣，內(nèi)皮細(xì)胞損傷及局部缺血，至今病因不明，因該病在胎盤娩出后常很快緩解或自愈，有學(xué)者稱之為“胎盤病” [1]。故近年來圍繞子癇前期胎盤病理的研究逐漸展開。目前，“炎癥免疫過度激活”病因?qū)W說為多數(shù)學(xué)者認(rèn)可。NF-κB是機(jī)體內(nèi)重要的應(yīng)激反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子，在免疫炎癥等一系列反應(yīng)中扮演著重要的角色。本研究通過檢測早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期患者胎盤組織中NF–κB的表達(dá)，探討其在子癇前期發(fā)生發(fā)展中的作用。
1 資料與方法
1.1 一般資料 選擇2011年8月-2013年10月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科分娩的孕產(chǎn)婦共70例，分為20例早發(fā)型子癇前期組（early-onset preeclampsia），20例晚發(fā)型子癇前期組（late-onset preeclampsia）（診斷標(biāo)準(zhǔn)參照人衛(wèi)版《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版），30例同期在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科分娩的正常孕婦為對照組（所有研究對象均無其他內(nèi)外科合并癥及并發(fā)癥）。
1.2 方法
1.2.1 標(biāo)本采集 胎盤娩出后取胎盤母體面1.0 cm×
1.0 cm×1.0 cm實(shí)質(zhì)組織，10%福爾馬林固定，24 h后脫水、透明、浸蠟、切片、編號保存。
1.2.2 免疫組織SP法 一抗為鼠抗人單克隆抗體NF-κBp65濃縮液，使用PV-9000試劑盒和DAB顯色（均購于北京中杉生物技術(shù)公司），按試劑說明書操作，以PBS代替一抗作陰性對照。
1.2.3 結(jié)果判定 采用Image8000彩色圖像分析儀進(jìn)行圖象采集分析，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（40倍），以陽性區(qū)進(jìn)行平均光密度分析，以平均值表示胎盤組織內(nèi)NF-κBp65的著色強(qiáng)度。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)和方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 胎盤NF-κBp65染色 胎盤中NF-κBp65主要表達(dá)于滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、少量間質(zhì)細(xì)胞胞漿及胞核內(nèi)。本研究用免疫組化結(jié)果顯示子癇前期患者胎盤絨毛血管及細(xì)小動脈內(nèi)皮細(xì)胞胞漿、胞核NF-κBp65染色較正常妊娠胎盤組織明顯增強(qiáng)，且早發(fā)型組染色強(qiáng)于晚發(fā)型組，見圖1～3。以PBS代替一抗作陰性對照，見圖4。
3 討論
子癇前期（Preeclampsia）是妊娠期特有并發(fā)癥，在妊娠中的發(fā)病率為7%～10%，在我國的發(fā)病率為9.4%[2]。近年來早發(fā)型子癇前期由于發(fā)病早、距離足月為時(shí)較遠(yuǎn)，母體病情發(fā)展快、并發(fā)癥重、產(chǎn)后出血及腦血管意外發(fā)生率及病死率均增加，胎兒宮內(nèi)生長受限、胎兒窘迫，新生兒孕周小、出生后并發(fā)癥多、存活率低成為產(chǎn)科醫(yī)生面臨的難題[3-5]。至今為止，本病的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。有學(xué)者提出子癇前期發(fā)病機(jī)制“兩階段”學(xué)說，第一階段為臨床前期，即子宮螺旋動脈滋養(yǎng)細(xì)胞重鑄障礙，導(dǎo)致胎盤缺血、缺氧，釋放多種胎盤因子；第二階段胎盤因子進(jìn)入母體血液循環(huán)，則促進(jìn)系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)的激活及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，引起子癇前期各種臨床癥狀[6-8]。
核因子-κB（Nuclear factor–kappaB，NF-κB）是重要的一種廣泛存在于組織和細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在機(jī)體的免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)等生理、病理過程中發(fā)揮重要作用[9-11]。典型的NF-κB是由p50和p65亞基形成的異二聚體。p65是其活性亞基，在細(xì)胞靜止時(shí)，p65與IκBs結(jié)合位于細(xì)胞漿中，當(dāng)細(xì)胞接受外來刺激后，p65與IκBs解聚，活化的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，啟動相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄。故NF-κBp65免疫染色可反映NF-κB活性[12-13]。NF-κB可以誘導(dǎo)許多免疫炎癥反應(yīng)相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄，在免疫炎癥反應(yīng)中起重要作用。目前發(fā)現(xiàn)多數(shù)免疫炎癥介質(zhì)基因均受NF-κB調(diào)控，如腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-6、極低密度脂蛋白等。而許多學(xué)者認(rèn)為子癇前期患者無論是母胎界面局部還是全身均存在著炎癥免疫反應(yīng)過度激活現(xiàn)象。最新的研究顯示，母胎界面局部處于主導(dǎo)地位的天然免疫系統(tǒng)在子癇前期發(fā)病機(jī)制中起重要作用，而TLR4（Toll樣受體4）/NF-κB信號通路介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)在其中扮演著重要的角色[14]。胎兒是一個(gè)半移植物，成功的妊娠要求母體免疫系統(tǒng)對其充分耐受，現(xiàn)有的證據(jù)表明，子癇前期母體對胚胎免疫耐受降低，多種炎癥免疫介質(zhì)激活均可影響子宮螺旋小動脈重鑄，造成胎盤淺著床，進(jìn)而引起局部缺血及血管內(nèi)皮損傷 [15-16]。
本研究用免疫組化結(jié)果顯示子癇前期患者胎盤絨毛血管及細(xì)小動脈內(nèi)皮細(xì)胞胞漿、胞核NF-κBp65染色較正常妊娠胎盤組織明顯增強(qiáng)，且早發(fā)型組染色強(qiáng)于晚發(fā)型組。說明子癇前期患者胎盤NF-κB活化強(qiáng)度與病情嚴(yán)重程度成正相關(guān)，提示NF-κB激活與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。探討其機(jī)制可能系子癇前期胎盤微小血管壁重構(gòu)、胎盤血管炎癥等病理過程與NF-κB的活化具有相關(guān)性：子癇前期胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞淺著床，導(dǎo)致胎盤長期處于缺血缺氧狀態(tài)，缺血缺氧信號促使NF-κBp65亞基與IκBs解聚，胞漿內(nèi)NF-κB活化，進(jìn)而移動至胞核內(nèi)啟動其下游一系列免疫炎癥介質(zhì)如腫瘤壞死因子-α、氧自由基和脂質(zhì)過氧化物、極低密度脂蛋白、血管內(nèi)皮生長因子、白細(xì)胞介素-6等的基因轉(zhuǎn)錄，使免疫炎癥過度激活，形成級聯(lián)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致胎兒-母體免疫平衡失調(diào)，從而依次引起子宮胎盤血管的發(fā)育受阻和免疫損傷，胎盤缺血，胎盤釋放血漿細(xì)胞毒性因子增加，全身程度不同的血管內(nèi)皮受損和多系統(tǒng)、多臟器的損傷，最終導(dǎo)致子癇前期的發(fā)生。
綜上所述，NF-κB在子癇前期胎盤中的顯著激活，及其所形成的后續(xù)免疫炎癥級聯(lián)反應(yīng)，可能促進(jìn)子癇前期，特別是早發(fā)型子癇前期的病理發(fā)生與發(fā)展。真正揭示早發(fā)型與晚發(fā)型子癇前期與NF-κB的關(guān)系，還有待大量深入的研究。
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