簡述中藥腦脊液藥理學(xué)方法研究的概況_
2016-04-14 14:21:33 安裝信息網(wǎng)
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論文摘要：體外實(shí)驗(yàn)方法對于藥理學(xué)研究至關(guān)重要，特別是在細(xì)胞、亞細(xì)胞、分子等水平進(jìn)行深入的機(jī)制研究時，但此方法對于中藥而言，存在許多問題。中藥血清藥理學(xué)作為一種新的體外試驗(yàn)方法，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果被證明更加可信，與整體實(shí)驗(yàn)的相關(guān)性更好。隨著中醫(yī)藥研究的不斷深入以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病防治的需要，中藥復(fù)方有效成分是否能通過血腦屏障并產(chǎn)生效用已成為亟待解決的問題。中藥腦脊液藥理學(xué)方法的提出不僅為我們提供了一種科學(xué)的方法，更為中藥復(fù)方作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究帶來了新思路。
論文關(guān)鍵詞：血清藥理學(xué),中藥腦脊液藥理學(xué),體外培養(yǎng)
上世紀(jì)80年代由日本學(xué)者田代真一在日本第一屆和漢醫(yī)藥學(xué)會上首次提出的給動物灌服中藥一定時間后，取其血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的方法，受到了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注，并在其后的應(yīng)用中，國內(nèi)外學(xué)者很注重中藥復(fù)方血清制備方法的研究。上世紀(jì)90年代開始，中藥血清藥理學(xué)在我國興起。作為一種改良后的中藥藥理體外實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，它使人們對于中藥的評價系統(tǒng)產(chǎn)生了觀念上的改變，盡管存在一定的爭議，但此種方法的應(yīng)用對于中藥進(jìn)行藥理乃至藥效學(xué)的研究都起到了至關(guān)重要的作用。近年來，隨著中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病日益成為威脅人類健康的重主要疾病，如以神經(jīng)元病變?yōu)橹鞯呐两鹕『秃嗤㈩D病，及以急性腦出血為主的急性腦血管病變等的發(fā)病率都在逐年增高，進(jìn)而使得中藥及其復(fù)方對于神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制的研究日益興起，腦脊液藥理學(xué)這一概念隨之被提出。
1.中藥藥理作用特點(diǎn)
1.1中藥藥理作用的多效性
黃芩一味中藥的藥理作用就有抗病原微生物、抗變態(tài)反應(yīng)和抗炎、解熱、抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)cAMP等13項。
1.2中藥藥理作用的復(fù)雜性
1.2.1影響因素多
影響中藥藥理作用的因素有諸多方面，藥物因素有藥材、制劑、劑量和配伍等，機(jī)體因素包括生理因素、病理因素，此外還有環(huán)境因素等。藥材的不同產(chǎn)地、品種、采收季節(jié)、貯藏條件、制劑的不同炮制工藝劑型、劑量、煎煮方法、復(fù)方的不同配伍、機(jī)體的不同體質(zhì)、年齡、性別、情志、機(jī)體功能、環(huán)境的不同地理條件、氣候等等對中藥藥效都有不同程度的影響。
1.2.2藥效化學(xué)成分復(fù)雜
中藥中即使是單味藥材，其含有的化學(xué)成分也有幾十種甚至上百種，譬如人參，更何況中藥又多以復(fù)方用藥，藥效化學(xué)成分也極為復(fù)雜，有蛋白質(zhì)、肽類、氨基酸、脂類、糖類、苷類、生物堿、單寧、甾體、酚類、醌類、揮發(fā)油、維生素以及微量元素等多種成分。
1.3中藥藥理作用雙向調(diào)節(jié)性
中藥的雙向調(diào)節(jié)作用為同一藥物對機(jī)體某一功能合適劑量時使之興奮，超大劑量時使之抑制；或同一藥物對機(jī)體若干功能，有的呈現(xiàn)抑制效應(yīng)，有的呈現(xiàn)興奮效應(yīng)，麝香主要成分麝香酮小劑量可縮短戊巴比妥鈉所致的小鼠睡眠時間，大劑量則使睡眠時間延長。表現(xiàn)為雙向性影響。即小劑量興奮神經(jīng)系統(tǒng)，大劑量抑制。
1.4中藥藥理作用整體平衡性
中藥及其復(fù)方種類繁多，功效復(fù)雜，但其基本作用為“扶正祛邪，調(diào)節(jié)平衡”，通過扶正祛邪來增強(qiáng)機(jī)體抗病能力，現(xiàn)代研究表明補(bǔ)益藥，如：人參、黃芪等主要是通過增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能，尤其是下丘腦一垂體一性腺軸功能而產(chǎn)生扶正之功效。通過調(diào)整陰陽，調(diào)和氣血使機(jī)體的各功能相互協(xié)調(diào)與平衡，如寒涼藥能減輕或消除熱證，溫?zé)崴幠軠p輕或消除寒證，補(bǔ)偏救弊，促進(jìn)平衡是中藥治療疾病的根本法則之一。
2.中藥藥效作用機(jī)理的研究進(jìn)展
2.1中藥學(xué)清藥理學(xué)
2.1.1中藥血清藥理學(xué)方法的優(yōu)勢和特色
中藥藥理學(xué)方法是在以前體外實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)形成的，即以含藥血清代替中藥粗提物進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，它不僅具有體外實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)：如條件可控性強(qiáng)，可在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平進(jìn)行超微、生化、受體、基因等方面的研究；揭示藥物作用機(jī)理較為深入，重復(fù)性好，使
用材料少等，而且有其更適合中藥及其復(fù)方制劑研究的獨(dú)特之處。因?yàn)橹兴幱绕涫菑?fù)方制劑的化學(xué)成分極其復(fù)雜，經(jīng)過體外的煎煮或其他制備過程，再經(jīng)口服以后在體內(nèi)發(fā)生一系列變化，有的是藥物本身物質(zhì)發(fā)揮作用，有的是經(jīng)過肝臟代謝的產(chǎn)物發(fā)揮作用，有的是腸道細(xì)菌代謝產(chǎn)物發(fā)揮作用。因此，以中藥的粗提物的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果來評價藥物的體內(nèi)效應(yīng)是不客觀的也是不確切的。以含藥血清代替中藥粗提物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)更接近藥物在體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥效的真實(shí)過程。
中藥血清藥理學(xué)方法優(yōu)點(diǎn)如下：采用含藥血清培養(yǎng)細(xì)胞可以直接觀察中藥的藥物學(xué)效應(yīng)，便于從微觀闡明藥物作用機(jī)理；利于用現(xiàn)代生命科學(xué)闡明中藥復(fù)方配伍實(shí)質(zhì)，便于觀察和追蹤藥物的吸收和代謝過程，排除體外干擾因素影響，較清楚地認(rèn)識藥物活性成分和活性部位，為藥物進(jìn)一步開發(fā)提供依據(jù)。因而特別適用于中藥及復(fù)方藥理作用和化學(xué)成分的研究。
2.1.2中藥血清藥理學(xué)方法研究中的幾個關(guān)鍵技術(shù)
血清藥理學(xué)方法的問題主要集中在實(shí)驗(yàn)動物的選擇、給藥次數(shù)與時間、給藥劑量、含藥血清的采集以及含藥血清的滅活等幾個方面，其關(guān)鍵技術(shù)在于含藥血清的采集、含藥血清的預(yù)處理以及血清藥理實(shí)驗(yàn)作用效應(yīng)-劑量關(guān)系這3個方面。血清藥理學(xué)在方法學(xué)上解決了中藥復(fù)方提取物直接應(yīng)用于離體實(shí)驗(yàn)的難點(diǎn),可以研究進(jìn)入體內(nèi)的中藥有效成分或其代謝產(chǎn)物的藥理作用。
2.2中藥腦脊液藥理學(xué)
2.2.1腦脊液藥理學(xué)方法的建立及優(yōu)勢
由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障的存在，使腦的內(nèi)環(huán)境、神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生存的微環(huán)境與自身血液系統(tǒng)有著顯著的不同,而且藥物是否能透過血腦屏障已成為研究中藥神經(jīng)保護(hù)作用的關(guān)鍵;同時,由于血清中含有多種活性酶及蛋白,對神經(jīng)細(xì)胞均有一定的影響。 梅建勛等、馮淑怡等的實(shí)驗(yàn)證明也了這一點(diǎn)，并發(fā)現(xiàn)利用含藥腦脊液進(jìn)行中藥對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效觀察明顯優(yōu)于血清藥理學(xué)方法�；谏鲜鲈�,梅建勛等在研究中藥復(fù)方對神經(jīng)保護(hù)作用時,初次提出了腦脊液藥理學(xué)的概念。在該研究小組隨后的清腦益智方對谷氨酸損傷神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究中,正式建立了中藥腦脊液藥理學(xué)方法,即用含藥腦脊液代替含藥血清,研究中藥及其復(fù)方對神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：無論是正常血清還是藥物血清均顯現(xiàn)對神經(jīng)元的毒害作用，對于觀察中藥的藥理作用產(chǎn)生了障礙，而采用腦脊液則可以克服上述缺點(diǎn)。
腦脊液藥理學(xué)優(yōu)勢主要有以下幾個方面:一,中藥及復(fù)方的化學(xué)成分,在生物體內(nèi)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化成活性成分,或代謝后失活,或沒有被吸收入體內(nèi),或通過第2、3信使等信號級聯(lián)反應(yīng)間接起作用,這使得中藥及復(fù)方的研究趨于困難;又由于化學(xué)成分或生物活性成分通過血腦屏障的數(shù)量有限;而腦脊液藥理學(xué)的方法可以簡化這種研究過程。二,腦脊液藥理學(xué)排除了體外實(shí)驗(yàn)的各種干擾因素,可直接以觀察中藥及復(fù)方作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效學(xué)效應(yīng)為導(dǎo)向,確證中藥及復(fù)方藥物中主要的有效成分及生物活性部分。三,血清本身內(nèi)源性成分復(fù)雜,含有多種活性物質(zhì)對神經(jīng)細(xì)胞有一定影響;而腦脊液避免了血清本身的毒害作用所遮蓋的藥效作用。四,腦脊液藥理學(xué)方法不但適用于口服給藥的中藥對神經(jīng)保護(hù)作用研究,也適合于注射給藥的藥物研究。五,腦脊液藥理學(xué)更解決了中藥大分子能否通過血腦屏障的問題,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究中,更具有科學(xué)性、真實(shí)性、可行性。
2.2.2中藥腦脊液藥理學(xué)方法研究中的關(guān)鍵技術(shù)
腦脊液藥理學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法,是一種新興的主要評價作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，其實(shí)驗(yàn)條件尚不十分成熟,還需要進(jìn)一步完善。張啟春等，通過觀察當(dāng)歸芍藥散精簡方(FBD)含藥腦脊液在不同條件下(給藥方案、添加量、處理方法、批次及保存時間)對過氧化氫所致PC12細(xì)胞損傷模型的保護(hù)作用,對腦脊液藥理實(shí)驗(yàn)條件規(guī)范化進(jìn)行了初步探討。而該方法的關(guān)鍵在于獲得有效的含藥腦脊液，其主要環(huán)節(jié)包括以下幾方面：一,動物的選擇,一般多選用大鼠、家兔、犬等動物來制備含藥腦脊液,由于各種動物間存在種屬差異,且腦脊液含量相對較少,采集比較困難。因此在采用腦脊液藥理學(xué)方法時,一方面,應(yīng)考慮制備腦脊液的動物應(yīng)與獲得離體細(xì)胞的動物相一致,從而縮小動物腦脊液間在理化、生物等特性上的差異,減少因種屬差異造成的免疫反應(yīng);另一方面,根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需求,確定含藥腦脊液的用量。二,給藥次數(shù)及給藥劑量。大多實(shí)驗(yàn)研究通過增加給藥劑量倍數(shù)來彌補(bǔ)實(shí)驗(yàn)時所稀釋倍數(shù);但是,含藥腦脊液組和含藥腦脊液凍干濃縮組比較,對β樣淀粉蛋白所致細(xì)胞損傷研究顯示,含藥腦脊液凍干濃縮組保護(hù)作用較強(qiáng),提示增加給藥劑量不一定被動物吸收、分布和代謝等,這可能導(dǎo)致藥效濃度與腦內(nèi)產(chǎn)生效應(yīng)的內(nèi)環(huán)境存在差異所致。因此，為了使試驗(yàn)條件更接近于藥物在體內(nèi)產(chǎn)生效應(yīng)的內(nèi)環(huán)境,建議含藥腦脊液的制備,可采用連續(xù)多次給藥方案,無需滅活處理,一般以體外添加終體積的10%、-20℃保存、不超過30d為宜。三,腦脊液的采集方法及制備技術(shù)。準(zhǔn)確的采集足量的含藥腦脊液,是腦脊液藥理學(xué)方法中至關(guān)重要的一步。富宏等,采用經(jīng)皮穿刺延髓池抽取兔和大鼠腦脊液的方法;曹遠(yuǎn)東等，對比了兩種采集SD大鼠腦脊液方法后，認(rèn)為經(jīng)枕骨大孔法簡單易行，損傷小，并發(fā)癥少，成功率高，優(yōu)于經(jīng)側(cè)腦室法；李惠勉等設(shè)計了一種經(jīng)顱鉆孔開窗置管采集兔腦脊液的方法，此方法采集腦脊液量大且快速省時。
2.2.3腦脊液藥理學(xué)的應(yīng)用現(xiàn)狀及前景
近年來，腦脊液藥理學(xué)的應(yīng)用主要集中在中藥復(fù)方對防治腦血管疾病的作用機(jī)制的研究上,主要包括對海馬神經(jīng)細(xì)胞、皮層神經(jīng)細(xì)胞、凋亡的抑制作用以及對PC12細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用以及星形膠質(zhì)細(xì)胞CRL-2541活力和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP表達(dá)的影響等的體外觀察。
腦脊液藥理學(xué)方法為研究中藥及其復(fù)方在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療方面提供了新的思路及行之有效的途徑，具有良好的應(yīng)用前景。
參考文獻(xiàn)
1 Htioko I, Sekae A, Yukio O.Effect of shosaikoto, a Japanese and Chinese herbalmedici nal mixture on the mitogenic activity oflipopolysaocharide, a new pharmacological testi ng method [ J ] .J Ethnohperm acol, 1987,21: 45-53.
2 梅建勛,張伯禮,陸融.中藥腦脊液藥理學(xué)研究方法的初建—對中藥影響的星形膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)營養(yǎng)作用的觀察[ J ].中草藥,2000,31: 523-526.
3 張方,黃泰康.中藥藥效研究方法進(jìn)展 [ J ].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2004,21(2):156-159.
4 黃泰康.常用中藥成分與藥理手冊[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1994,1866—1868.
5 薛潔,謝梅林.中藥血清藥理學(xué)的方法學(xué)研究近況[ J ].中草藥,2003,34(6):附9~l1.
6 孫艷紅,方曉艷,劉紅雨.中藥血清藥理學(xué)方法研究概況[ J ].時珍國醫(yī)國藥.2002,13(2):ll4~l15.
7 劉成海.抗肝纖維化有效中藥復(fù)方血清藥理學(xué)方法探討[ J ].中實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志.1998,4(2):16~19.
8 崔曉蘭,賀玉琢,高英杰,等. 中藥復(fù)方血清藥理研究方法學(xué)探討Ⅲ[ J ].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,1998,4(3):45.
9 王力倩,李儀奎,等.血清藥理學(xué)方法研究探索[ J ].中藥藥理與臨床,1997,13(2):35.
10 周明眉,楊奎,姜遠(yuǎn)平,等. 中藥血清藥理學(xué)的方法學(xué)研究(Ⅳ)——采血時間的確定及時效關(guān)系研究.中藥藥理與臨床[ J ].1998,14(增):110.
11 黃敏,楊坤杰.中藥血清藥理學(xué)的研究方法及其改進(jìn)思路[ J ].湖北中醫(yī)雜志, 2006, 28:24-25.
12 馮淑怡.含與不含朱砂雄黃的安宮牛黃丸對大鼠出血性腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)理研究[D ]. 北京:北京中醫(yī)藥大學(xué), 2007.
13 梅建勛,張伯禮,陸融. 中藥腦脊液藥理學(xué)方法的建立—清腦益智方對谷氨酸損傷神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[ J ].天津中醫(yī),1999,16: 25.
14 閆晨,康立源.中藥腦脊液藥理學(xué)方法研究進(jìn)展[ J ].中國臨床藥理學(xué)雜志,2009,25(3):257-259.
15 張啟春,寇俊萍,朱丹妮,等.腦脊液藥理實(shí)驗(yàn)條件規(guī)范化初探—當(dāng)歸芍藥散精簡方的神經(jīng)保護(hù)作用[ J ] .中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2007,13: 10-13.
16 Van den Berg MP , Romeijn SG,Verhoef JC , et al . Serial cerebrospinal fluid sampling in a rat model tostudy drug uptake from the nasal cavity[J ] . J Neurosci Methods ,2002 ,116 (1):99-107.
17 富宏,陶迎紅,王學(xué)美,等. 經(jīng)皮穿刺延髓池抽取兔和大鼠腦脊液的方法[ J ]..中國比較醫(yī)學(xué)雜志.2006,16(11):684-687.
18 曹遠(yuǎn)東,章龍珍,王梅申,等.兩種采集SD大鼠腦脊液方法的比較[ J ].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,25(4):317-319.
19 李惠勉,李建章,姚淑芬.一種實(shí)用的采集兔腦脊液方法[ J ] .解剖學(xué)雜志, 2000,23: 488.
20 謝寧,鄒純樸,牛英才,等.地黃飲子對海馬神經(jīng)元AD模型細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用[ J ].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2004,10: 29-32.
21 郭建文,何迎春,陳紹宏.Beagle犬含藥腦脊液對神經(jīng)細(xì)胞損傷保護(hù)作用的最佳劑量研究[ J ].中醫(yī)藥通報, 2005, 4: 54-58.
22 郭建文,何迎春,陳紹宏,等.Beagle犬含藥腦脊液干預(yù)皮層神經(jīng)元出血損傷細(xì)胞凋亡時間窗的實(shí)驗(yàn)研究[ J ] .中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2005,3: 884-886.
23 林志宏,嚴(yán)永清,朱丹妮,等.當(dāng)歸芍藥散對β2淀粉樣蛋白致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[ J ].中國藥科大學(xué)學(xué)報, 2005,36:346-349.
24 馬偉,馬鋒,苗珍花,等.六味地黃湯含藥腦脊液對α7煙堿型乙酰膽堿受體保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[ J ] .寧夏醫(yī)學(xué)雜志, 2008,30: 289-291.
25 劉潔,林志宏,朱丹妮,等.當(dāng)歸芍藥散防治老年期癡呆的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)理研究X—精簡方及其CO2 超臨界萃取物對星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用[ J ] .中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2007,13: 14-17.
26 彭亞琴,陳君梅,晏雪生,等.乳黃片對高氨環(huán)境中的星形膠質(zhì)細(xì)胞的活力及GFAP表達(dá)的影響[ J ].中醫(yī)藥學(xué)刊, 2006,24:2046-2047.
論文關(guān)鍵詞：血清藥理學(xué),中藥腦脊液藥理學(xué),體外培養(yǎng)
上世紀(jì)80年代由日本學(xué)者田代真一在日本第一屆和漢醫(yī)藥學(xué)會上首次提出的給動物灌服中藥一定時間后，取其血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的方法，受到了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注，并在其后的應(yīng)用中，國內(nèi)外學(xué)者很注重中藥復(fù)方血清制備方法的研究。上世紀(jì)90年代開始，中藥血清藥理學(xué)在我國興起。作為一種改良后的中藥藥理體外實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，它使人們對于中藥的評價系統(tǒng)產(chǎn)生了觀念上的改變，盡管存在一定的爭議，但此種方法的應(yīng)用對于中藥進(jìn)行藥理乃至藥效學(xué)的研究都起到了至關(guān)重要的作用。近年來，隨著中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病日益成為威脅人類健康的重主要疾病，如以神經(jīng)元病變?yōu)橹鞯呐两鹕『秃嗤㈩D病，及以急性腦出血為主的急性腦血管病變等的發(fā)病率都在逐年增高，進(jìn)而使得中藥及其復(fù)方對于神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制的研究日益興起，腦脊液藥理學(xué)這一概念隨之被提出。
1.中藥藥理作用特點(diǎn)
1.1中藥藥理作用的多效性
黃芩一味中藥的藥理作用就有抗病原微生物、抗變態(tài)反應(yīng)和抗炎、解熱、抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)cAMP等13項。
1.2中藥藥理作用的復(fù)雜性
1.2.1影響因素多
影響中藥藥理作用的因素有諸多方面，藥物因素有藥材、制劑、劑量和配伍等，機(jī)體因素包括生理因素、病理因素，此外還有環(huán)境因素等。藥材的不同產(chǎn)地、品種、采收季節(jié)、貯藏條件、制劑的不同炮制工藝劑型、劑量、煎煮方法、復(fù)方的不同配伍、機(jī)體的不同體質(zhì)、年齡、性別、情志、機(jī)體功能、環(huán)境的不同地理條件、氣候等等對中藥藥效都有不同程度的影響。
1.2.2藥效化學(xué)成分復(fù)雜
中藥中即使是單味藥材，其含有的化學(xué)成分也有幾十種甚至上百種，譬如人參，更何況中藥又多以復(fù)方用藥，藥效化學(xué)成分也極為復(fù)雜，有蛋白質(zhì)、肽類、氨基酸、脂類、糖類、苷類、生物堿、單寧、甾體、酚類、醌類、揮發(fā)油、維生素以及微量元素等多種成分。
1.3中藥藥理作用雙向調(diào)節(jié)性
中藥的雙向調(diào)節(jié)作用為同一藥物對機(jī)體某一功能合適劑量時使之興奮，超大劑量時使之抑制；或同一藥物對機(jī)體若干功能，有的呈現(xiàn)抑制效應(yīng)，有的呈現(xiàn)興奮效應(yīng)，麝香主要成分麝香酮小劑量可縮短戊巴比妥鈉所致的小鼠睡眠時間，大劑量則使睡眠時間延長。表現(xiàn)為雙向性影響。即小劑量興奮神經(jīng)系統(tǒng)，大劑量抑制。
1.4中藥藥理作用整體平衡性
中藥及其復(fù)方種類繁多，功效復(fù)雜，但其基本作用為“扶正祛邪，調(diào)節(jié)平衡”，通過扶正祛邪來增強(qiáng)機(jī)體抗病能力，現(xiàn)代研究表明補(bǔ)益藥，如：人參、黃芪等主要是通過增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能，尤其是下丘腦一垂體一性腺軸功能而產(chǎn)生扶正之功效。通過調(diào)整陰陽，調(diào)和氣血使機(jī)體的各功能相互協(xié)調(diào)與平衡，如寒涼藥能減輕或消除熱證，溫?zé)崴幠軠p輕或消除寒證，補(bǔ)偏救弊，促進(jìn)平衡是中藥治療疾病的根本法則之一。
2.中藥藥效作用機(jī)理的研究進(jìn)展
2.1中藥學(xué)清藥理學(xué)
2.1.1中藥血清藥理學(xué)方法的優(yōu)勢和特色
中藥藥理學(xué)方法是在以前體外實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)形成的，即以含藥血清代替中藥粗提物進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，它不僅具有體外實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)：如條件可控性強(qiáng)，可在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平進(jìn)行超微、生化、受體、基因等方面的研究；揭示藥物作用機(jī)理較為深入，重復(fù)性好，使
用材料少等，而且有其更適合中藥及其復(fù)方制劑研究的獨(dú)特之處。因?yàn)橹兴幱绕涫菑?fù)方制劑的化學(xué)成分極其復(fù)雜，經(jīng)過體外的煎煮或其他制備過程，再經(jīng)口服以后在體內(nèi)發(fā)生一系列變化，有的是藥物本身物質(zhì)發(fā)揮作用，有的是經(jīng)過肝臟代謝的產(chǎn)物發(fā)揮作用，有的是腸道細(xì)菌代謝產(chǎn)物發(fā)揮作用。因此，以中藥的粗提物的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果來評價藥物的體內(nèi)效應(yīng)是不客觀的也是不確切的。以含藥血清代替中藥粗提物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)更接近藥物在體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥效的真實(shí)過程。
中藥血清藥理學(xué)方法優(yōu)點(diǎn)如下：采用含藥血清培養(yǎng)細(xì)胞可以直接觀察中藥的藥物學(xué)效應(yīng)，便于從微觀闡明藥物作用機(jī)理；利于用現(xiàn)代生命科學(xué)闡明中藥復(fù)方配伍實(shí)質(zhì)，便于觀察和追蹤藥物的吸收和代謝過程，排除體外干擾因素影響，較清楚地認(rèn)識藥物活性成分和活性部位，為藥物進(jìn)一步開發(fā)提供依據(jù)。因而特別適用于中藥及復(fù)方藥理作用和化學(xué)成分的研究。
2.1.2中藥血清藥理學(xué)方法研究中的幾個關(guān)鍵技術(shù)
血清藥理學(xué)方法的問題主要集中在實(shí)驗(yàn)動物的選擇、給藥次數(shù)與時間、給藥劑量、含藥血清的采集以及含藥血清的滅活等幾個方面，其關(guān)鍵技術(shù)在于含藥血清的采集、含藥血清的預(yù)處理以及血清藥理實(shí)驗(yàn)作用效應(yīng)-劑量關(guān)系這3個方面。血清藥理學(xué)在方法學(xué)上解決了中藥復(fù)方提取物直接應(yīng)用于離體實(shí)驗(yàn)的難點(diǎn),可以研究進(jìn)入體內(nèi)的中藥有效成分或其代謝產(chǎn)物的藥理作用。
2.2中藥腦脊液藥理學(xué)
2.2.1腦脊液藥理學(xué)方法的建立及優(yōu)勢
由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障的存在，使腦的內(nèi)環(huán)境、神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生存的微環(huán)境與自身血液系統(tǒng)有著顯著的不同,而且藥物是否能透過血腦屏障已成為研究中藥神經(jīng)保護(hù)作用的關(guān)鍵;同時,由于血清中含有多種活性酶及蛋白,對神經(jīng)細(xì)胞均有一定的影響。 梅建勛等、馮淑怡等的實(shí)驗(yàn)證明也了這一點(diǎn)，并發(fā)現(xiàn)利用含藥腦脊液進(jìn)行中藥對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效觀察明顯優(yōu)于血清藥理學(xué)方法�；谏鲜鲈�,梅建勛等在研究中藥復(fù)方對神經(jīng)保護(hù)作用時,初次提出了腦脊液藥理學(xué)的概念。在該研究小組隨后的清腦益智方對谷氨酸損傷神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究中,正式建立了中藥腦脊液藥理學(xué)方法,即用含藥腦脊液代替含藥血清,研究中藥及其復(fù)方對神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：無論是正常血清還是藥物血清均顯現(xiàn)對神經(jīng)元的毒害作用，對于觀察中藥的藥理作用產(chǎn)生了障礙，而采用腦脊液則可以克服上述缺點(diǎn)。
腦脊液藥理學(xué)優(yōu)勢主要有以下幾個方面:一,中藥及復(fù)方的化學(xué)成分,在生物體內(nèi)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化成活性成分,或代謝后失活,或沒有被吸收入體內(nèi),或通過第2、3信使等信號級聯(lián)反應(yīng)間接起作用,這使得中藥及復(fù)方的研究趨于困難;又由于化學(xué)成分或生物活性成分通過血腦屏障的數(shù)量有限;而腦脊液藥理學(xué)的方法可以簡化這種研究過程。二,腦脊液藥理學(xué)排除了體外實(shí)驗(yàn)的各種干擾因素,可直接以觀察中藥及復(fù)方作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效學(xué)效應(yīng)為導(dǎo)向,確證中藥及復(fù)方藥物中主要的有效成分及生物活性部分。三,血清本身內(nèi)源性成分復(fù)雜,含有多種活性物質(zhì)對神經(jīng)細(xì)胞有一定影響;而腦脊液避免了血清本身的毒害作用所遮蓋的藥效作用。四,腦脊液藥理學(xué)方法不但適用于口服給藥的中藥對神經(jīng)保護(hù)作用研究,也適合于注射給藥的藥物研究。五,腦脊液藥理學(xué)更解決了中藥大分子能否通過血腦屏障的問題,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究中,更具有科學(xué)性、真實(shí)性、可行性。
2.2.2中藥腦脊液藥理學(xué)方法研究中的關(guān)鍵技術(shù)
腦脊液藥理學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法,是一種新興的主要評價作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，其實(shí)驗(yàn)條件尚不十分成熟,還需要進(jìn)一步完善。張啟春等，通過觀察當(dāng)歸芍藥散精簡方(FBD)含藥腦脊液在不同條件下(給藥方案、添加量、處理方法、批次及保存時間)對過氧化氫所致PC12細(xì)胞損傷模型的保護(hù)作用,對腦脊液藥理實(shí)驗(yàn)條件規(guī)范化進(jìn)行了初步探討。而該方法的關(guān)鍵在于獲得有效的含藥腦脊液，其主要環(huán)節(jié)包括以下幾方面：一,動物的選擇,一般多選用大鼠、家兔、犬等動物來制備含藥腦脊液,由于各種動物間存在種屬差異,且腦脊液含量相對較少,采集比較困難。因此在采用腦脊液藥理學(xué)方法時,一方面,應(yīng)考慮制備腦脊液的動物應(yīng)與獲得離體細(xì)胞的動物相一致,從而縮小動物腦脊液間在理化、生物等特性上的差異,減少因種屬差異造成的免疫反應(yīng);另一方面,根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需求,確定含藥腦脊液的用量。二,給藥次數(shù)及給藥劑量。大多實(shí)驗(yàn)研究通過增加給藥劑量倍數(shù)來彌補(bǔ)實(shí)驗(yàn)時所稀釋倍數(shù);但是,含藥腦脊液組和含藥腦脊液凍干濃縮組比較,對β樣淀粉蛋白所致細(xì)胞損傷研究顯示,含藥腦脊液凍干濃縮組保護(hù)作用較強(qiáng),提示增加給藥劑量不一定被動物吸收、分布和代謝等,這可能導(dǎo)致藥效濃度與腦內(nèi)產(chǎn)生效應(yīng)的內(nèi)環(huán)境存在差異所致。因此，為了使試驗(yàn)條件更接近于藥物在體內(nèi)產(chǎn)生效應(yīng)的內(nèi)環(huán)境,建議含藥腦脊液的制備,可采用連續(xù)多次給藥方案,無需滅活處理,一般以體外添加終體積的10%、-20℃保存、不超過30d為宜。三,腦脊液的采集方法及制備技術(shù)。準(zhǔn)確的采集足量的含藥腦脊液,是腦脊液藥理學(xué)方法中至關(guān)重要的一步。富宏等,采用經(jīng)皮穿刺延髓池抽取兔和大鼠腦脊液的方法;曹遠(yuǎn)東等，對比了兩種采集SD大鼠腦脊液方法后，認(rèn)為經(jīng)枕骨大孔法簡單易行，損傷小，并發(fā)癥少，成功率高，優(yōu)于經(jīng)側(cè)腦室法；李惠勉等設(shè)計了一種經(jīng)顱鉆孔開窗置管采集兔腦脊液的方法，此方法采集腦脊液量大且快速省時。
2.2.3腦脊液藥理學(xué)的應(yīng)用現(xiàn)狀及前景
近年來，腦脊液藥理學(xué)的應(yīng)用主要集中在中藥復(fù)方對防治腦血管疾病的作用機(jī)制的研究上,主要包括對海馬神經(jīng)細(xì)胞、皮層神經(jīng)細(xì)胞、凋亡的抑制作用以及對PC12細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用以及星形膠質(zhì)細(xì)胞CRL-2541活力和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP表達(dá)的影響等的體外觀察。
腦脊液藥理學(xué)方法為研究中藥及其復(fù)方在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療方面提供了新的思路及行之有效的途徑，具有良好的應(yīng)用前景。
參考文獻(xiàn)
1 Htioko I, Sekae A, Yukio O.Effect of shosaikoto, a Japanese and Chinese herbalmedici nal mixture on the mitogenic activity oflipopolysaocharide, a new pharmacological testi ng method [ J ] .J Ethnohperm acol, 1987,21: 45-53.
2 梅建勛,張伯禮,陸融.中藥腦脊液藥理學(xué)研究方法的初建—對中藥影響的星形膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)營養(yǎng)作用的觀察[ J ].中草藥,2000,31: 523-526.
3 張方,黃泰康.中藥藥效研究方法進(jìn)展 [ J ].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2004,21(2):156-159.
4 黃泰康.常用中藥成分與藥理手冊[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1994,1866—1868.
5 薛潔,謝梅林.中藥血清藥理學(xué)的方法學(xué)研究近況[ J ].中草藥,2003,34(6):附9~l1.
6 孫艷紅,方曉艷,劉紅雨.中藥血清藥理學(xué)方法研究概況[ J ].時珍國醫(yī)國藥.2002,13(2):ll4~l15.
7 劉成海.抗肝纖維化有效中藥復(fù)方血清藥理學(xué)方法探討[ J ].中實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志.1998,4(2):16~19.
8 崔曉蘭,賀玉琢,高英杰,等. 中藥復(fù)方血清藥理研究方法學(xué)探討Ⅲ[ J ].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,1998,4(3):45.
9 王力倩,李儀奎,等.血清藥理學(xué)方法研究探索[ J ].中藥藥理與臨床,1997,13(2):35.
10 周明眉,楊奎,姜遠(yuǎn)平,等. 中藥血清藥理學(xué)的方法學(xué)研究(Ⅳ)——采血時間的確定及時效關(guān)系研究.中藥藥理與臨床[ J ].1998,14(增):110.
11 黃敏,楊坤杰.中藥血清藥理學(xué)的研究方法及其改進(jìn)思路[ J ].湖北中醫(yī)雜志, 2006, 28:24-25.
12 馮淑怡.含與不含朱砂雄黃的安宮牛黃丸對大鼠出血性腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)理研究[D ]. 北京:北京中醫(yī)藥大學(xué), 2007.
13 梅建勛,張伯禮,陸融. 中藥腦脊液藥理學(xué)方法的建立—清腦益智方對谷氨酸損傷神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[ J ].天津中醫(yī),1999,16: 25.
14 閆晨,康立源.中藥腦脊液藥理學(xué)方法研究進(jìn)展[ J ].中國臨床藥理學(xué)雜志,2009,25(3):257-259.
15 張啟春,寇俊萍,朱丹妮,等.腦脊液藥理實(shí)驗(yàn)條件規(guī)范化初探—當(dāng)歸芍藥散精簡方的神經(jīng)保護(hù)作用[ J ] .中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2007,13: 10-13.
16 Van den Berg MP , Romeijn SG,Verhoef JC , et al . Serial cerebrospinal fluid sampling in a rat model tostudy drug uptake from the nasal cavity[J ] . J Neurosci Methods ,2002 ,116 (1):99-107.
17 富宏,陶迎紅,王學(xué)美,等. 經(jīng)皮穿刺延髓池抽取兔和大鼠腦脊液的方法[ J ]..中國比較醫(yī)學(xué)雜志.2006,16(11):684-687.
18 曹遠(yuǎn)東,章龍珍,王梅申,等.兩種采集SD大鼠腦脊液方法的比較[ J ].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,25(4):317-319.
19 李惠勉,李建章,姚淑芬.一種實(shí)用的采集兔腦脊液方法[ J ] .解剖學(xué)雜志, 2000,23: 488.
20 謝寧,鄒純樸,牛英才,等.地黃飲子對海馬神經(jīng)元AD模型細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用[ J ].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2004,10: 29-32.
21 郭建文,何迎春,陳紹宏.Beagle犬含藥腦脊液對神經(jīng)細(xì)胞損傷保護(hù)作用的最佳劑量研究[ J ].中醫(yī)藥通報, 2005, 4: 54-58.
22 郭建文,何迎春,陳紹宏,等.Beagle犬含藥腦脊液干預(yù)皮層神經(jīng)元出血損傷細(xì)胞凋亡時間窗的實(shí)驗(yàn)研究[ J ] .中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2005,3: 884-886.
23 林志宏,嚴(yán)永清,朱丹妮,等.當(dāng)歸芍藥散對β2淀粉樣蛋白致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[ J ].中國藥科大學(xué)學(xué)報, 2005,36:346-349.
24 馬偉,馬鋒,苗珍花,等.六味地黃湯含藥腦脊液對α7煙堿型乙酰膽堿受體保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[ J ] .寧夏醫(yī)學(xué)雜志, 2008,30: 289-291.
25 劉潔,林志宏,朱丹妮,等.當(dāng)歸芍藥散防治老年期癡呆的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)理研究X—精簡方及其CO2 超臨界萃取物對星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用[ J ] .中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2007,13: 14-17.
26 彭亞琴,陳君梅,晏雪生,等.乳黃片對高氨環(huán)境中的星形膠質(zhì)細(xì)胞的活力及GFAP表達(dá)的影響[ J ].中醫(yī)藥學(xué)刊, 2006,24:2046-2047.
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