GC/MS法結(jié)合保留指數(shù)分析布枯葉油中揮發(fā)性成分
李源棟，冒德壽，劉秀明，夏建軍，者為，段焰青*
云南中煙工業(yè)有限責任公司技術中心(昆明650202)
摘要分析布枯葉油中揮發(fā)性成分．、采用CJC/MS聯(lián)用技術檢測。通過質(zhì)譜庫檢索，保留指數(shù)比對，分析并確定出布枯葉油中46個成分，占布枯葉油揮發(fā)性成分的86.21%。主要成分為：胡薄荷酮(29.51%、檸檬烯(16.50%)、異薄荷酮(10.05%、薄荷酮(7.30%)、異胡薄荷酮(4.26%)、a-蒎烯(2.060、3-甲基環(huán)己酮(2.03%)、月桂烯(1.96%)、2-羥基薄荷酮(1.68%)、β-蒎烯(1.28%和(E)-β-羅勒烯(1.25%)。通過保留時間指數(shù)來鑒別順反同分異構(gòu)體，提高了天然香原料中化合物定性的準確性，研究結(jié)果為布枯葉油產(chǎn)品開發(fā)和應用提供了理論依據(jù)。
關鍵詞 布枯葉油；氣相色譜／質(zhì)譜；揮發(fā)性成分；保留指數(shù)
布枯為蕓香科、巴洛斯馬屬小灌木，原產(chǎn)于南非，經(jīng)水蒸氣蒸餾干葉得精油。布枯油為深棕色液體，具有強烈甘苦味，帶薄荷一樟腦樣氣味，用于配制日用香精，也用于糖果、飲料和調(diào)味品等食品。布枯葉作為藥用植物，具有抗菌、抗氧化和抗炎等功效。目前關于布枯葉油香味成分報道相對較少，同時，關于天然提取的香源料中應用保留時間指數(shù)法對其色譜分析結(jié)果進行鑒定的報道也較少。試驗通過質(zhì)譜庫檢索，結(jié)合保留指數(shù)輔助定性，對布枯葉油中揮發(fā)性成分進行研究，較好地鑒別了同分異構(gòu)體或同系物，避免了在定性過程中出現(xiàn)誤判，提高了定性的準確性，該法為以后布枯葉油產(chǎn)品開發(fā)和質(zhì)量控制提供了理論指導。
1 材料及方法
1.1材料及儀器
布枯葉油：某香精香料公司；二氯甲烷、甲醇、正己烷：GR級，百靈威科技有限公司；正構(gòu)烷烴C7—C30:美國Sigma-Aidrich公司。
Agilent 7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀+自動進樣器：美國安捷倫科技有限公司；萬分之一電子天平：瑞士Mettler Tloede公司；10 m L移液器：德國Eppendorf公司。
1.2儀器工作條件
1.2.1色譜條件
RXl-5sil MS石英毛細管柱(60 m×0.25 mm×0.25μm)，載氣為氦氣（純度為99.999%），流速：1.0m L/min。升溫程序：初始溫度60℃，保持6 min；以3℃/min的速率升溫至180℃；再以10℃/min的速率升溫至230℃，保持10 min。進樣口溫度：250℃；進樣量：1.0 μL;分流比：10：1；溶劑延遲6 min。
1.2.2質(zhì)譜條件
離子源：電轟擊電離( EI)源；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；電離能量：70 e V;傳輸線溫度：280℃；掃描范圍：40～450（m/z）；質(zhì)譜檢索圖庫：Nistll譜庫。
1.2.3定性定量方法
布枯葉油經(jīng)過GC/MS分析后，利用Nistll質(zhì)譜庫對布枯葉油中揮發(fā)性成分進行自動檢索，然后通過自我開發(fā)的保留指數(shù)軟件求出各成分保留指數(shù)，將軟件計算的保留指數(shù)與ESO精油數(shù)據(jù)庫中保留指數(shù)進行比對（可接受誤差不超過3%），對其進行定性，之后采用色譜峰面積歸一化法計算出各成分相對百分含量。
2試驗方法
2.1樣品的處理
根據(jù)樣品性質(zhì)，采用直接稀釋進樣的方法，具體操作如下：準確稱取布枯葉油0.20 g，用甲醇與二氯甲烷（體積比為1:4）混合溶液稀釋到10 m L，進樣前需要將樣品用0.45ILm有機相濾膜過濾，測定按照
1.2儀器工作條件進行。
2.2正構(gòu)烷烴溶液配制
準確稱取正構(gòu)烷烴C7～C30標準品，用正己烷溶液將其稀釋成質(zhì)量分數(shù)為5%溶液，按照1.2儀器操作條件進樣，求出正構(gòu)烷烴C1~C30保留時間，為下一步計算布枯葉油中各成分保留指數(shù)做準備。
3結(jié)果與討論
3.1 布枯葉油揮發(fā)性成分分析
布枯葉油經(jīng)GC/MS檢測所得到總離子流色譜圖見圖1，采用Nistll質(zhì)譜庫進行檢索后結(jié)合ESO香精保留指數(shù)進行對比對其定性，利用面積歸一化計算得出布枯葉油中各成分相對百分含量，結(jié)果見表1所示。
從表1得出，通過質(zhì)譜庫檢索和人工圖譜解析，結(jié)合保留指數(shù)比對，最終分析并確定了46個化合物，占布枯葉油中揮發(fā)性成分86.21%，其中醇類10個(3.5 1%)，酯類7個(1.30%)，酮類7個(55.48%)，烷烯烴類16個(24.75%)，其他化合物3個(1.14%)，主要成分（含量>1%）：
胡薄荷酮(29.5 1%)、檸檬烯( 16.50%)、異薄荷酮(1 0.05%)、薄荷酮( 7.30%)、異胡薄荷酮(4.26%)、a-蒎烯(2.06%)、3-甲基環(huán)己酮( 2.03%)、月桂烯(1.96%)、2-羥基薄荷酮(1.68%)、β--蒎烯(1.28%)和β-羅勒烯( 1.25%)。其主要成分胡薄荷酮、異薄荷酮、薄荷酮和異胡薄荷酮、2-羥基薄荷酮等賦予布枯葉油特征香味（具有強烈甘苦味，帶薄荷一樟腦樣氣味），因此常被用于配制日用香精，也用于糖果、飲料和調(diào)味品等食品，目前已經(jīng)被GB 2760-2014“食品安全國家標準食品添加劑使用標準”批準允許使用的食品香精。
3.2保留指數(shù)在定性鑒定中的應用
保留指數(shù)常被用于未知化合物定性，對于天然香原料分析與鑒定，一般采用GC/MS方法，通過質(zhì)譜庫檢索、匹配度定性，從而能夠方便快速得到結(jié)果，但天然香原料成分及其復雜，同時還存在大量同分異構(gòu)體或同系物，往往會出現(xiàn)定性結(jié)果不準確。ESO精油數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)已經(jīng)收錄了大量香精香料保留指數(shù)。經(jīng)質(zhì)譜庫檢索后，利用ESO精油數(shù)據(jù)庫進行輔助定性，縮小了檢索范圍，能夠提高天然化合物定性準確性，盡量減少誤判和錯判。表2列舉了保留指數(shù)用于布枯葉油中揮發(fā)性成分定性鑒定的2個實例。
試驗對檢索出的46個化合物進行定性分析時，發(fā)現(xiàn)許多同分異構(gòu)體和同系物若僅用質(zhì)譜庫檢索定性會難以判定甚至誤判，尤其是同分異構(gòu)體的誤判，如表2所示，β-羅勒烯、蒎烯通過質(zhì)譜檢索，同分異構(gòu)體相似度較接近，難以確認其構(gòu)型，比對保留指數(shù)，可確認為( E)-β-羅勒烯和a-蒎烯。此外，薄荷酮、松油醇、松油烯和香芹醇等化合物的定性必須經(jīng)保留指數(shù)輔助方可進一步確認化合物結(jié)構(gòu)式。
4結(jié)論
利用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術，對布枯葉油的揮發(fā)性成分進行了分析，并用峰面積歸一化法計算了各成分的相對含量。通過質(zhì)譜庫檢索，保留指數(shù)比對，分析并確定出布枯葉油中的46個成分，占布枯葉油揮發(fā)性成分的86.21%。布枯葉油的主要成分為胡薄荷酮( 29.51%)、檸檬烯(16.50%)、異薄荷酮(10.05%)、薄荷酮(7.30%)、異胡薄荷酮(4.26%)、a-蒎烯(2.06%)、3-甲基環(huán)己酮(2.03%)、月桂烯(1.96%)、2-羥基薄荷酮(1.68%)、β-蒎烯(1.28%)和( E) -β-羅勒烯(1.25%)等。通過保留時間指數(shù)來鑒別順反同分異構(gòu)體，提高了天然香原料中化合物定性的準確性，研究結(jié)果為布枯葉油產(chǎn)品開發(fā)和應用提供了理論依據(jù)。
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