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作者： 張毅

    豆芽是常見(jiàn)的一種芽菜類蔬菜，品質(zhì)脆嫩，口感清甜，富含易于被消化吸收的蛋白質(zhì)、維生素及微量元素，且價(jià)廉物美，自古就是人們餐桌上頗受歡迎的一道美食小菜。20世紀(jì)80年代，我國(guó)開(kāi)始用無(wú)根豆芽藥劑代替勞動(dòng)強(qiáng)度大的人工去根的方法，豆芽生產(chǎn)中濫用藥劑的現(xiàn)象日漸嚴(yán)重，為了縮短豆芽生長(zhǎng)周期，增加豆芽品相，使豆芽看起來(lái)更肥嫩白凈，各種各樣的添加劑被用于豆芽生產(chǎn)，毒豆芽事件層出不窮，豆芽也成了不放心食品。

    塑化劑又名增塑劑，屬于鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)，具有增強(qiáng)柔韌、增稠等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于化妝品、農(nóng)藥、兒童玩具、食品包裝材料、塑料制品等生產(chǎn)過(guò)程：存在日常生活的方方面面，空氣和土壤中都含有微量的PAEs，通過(guò)呼吸、進(jìn)食、皮膚接觸等途徑進(jìn)入人體，PAEs具有類雌激素作用，被稱為“環(huán)境荷爾蒙”，能影響人類內(nèi)分泌系統(tǒng)，特別是男性，引起內(nèi)分泌紊亂，精子數(shù)量減少，生殖能力下降等影響，人體內(nèi)能產(chǎn)生一定的積累，長(zhǎng)期接觸或食用，對(duì)肝臟和泌尿系統(tǒng)造成不可逆轉(zhuǎn)的損傷，能引起肝癌和不孕。

  試驗(yàn)用在線凝膠滲透色譜測(cè)定豆芽中53種農(nóng)藥時(shí)，發(fā)現(xiàn)豆芽測(cè)定譜圖中有質(zhì)核比為149離子峰，譜庫(kù)檢索可能是塑化劑。目前，出版物中未發(fā)現(xiàn)豆芽中檢測(cè)PAEs的方法，只有高效液相色譜法、氣一質(zhì)聯(lián)用法和液一質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定白酒、食用油、乳制品、飲料中的PAEs，串聯(lián)氣質(zhì)對(duì)容易揮發(fā)藥物的測(cè)定有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，主要測(cè)定水果和蔬菜中的農(nóng)藥．PAEs容易揮發(fā)，建立用串聯(lián)氣質(zhì)測(cè)定豆芽中PAEs非常有意義：目前．尚不清楚豆芽中含有PAEs的確切原因，但有資科顯示一定濃度的PAEs能影響種子的發(fā)芽率。

1試驗(yàn)部分

1.1材料與試劑

    黃豆芽、綠豆芽、黑豆芽、豌豆芽：市售，基質(zhì)豆芽為優(yōu)質(zhì)黃豆、綠豆、黑豆、豌豆實(shí)驗(yàn)室清水培養(yǎng)。

    正己烷、丙酮：農(nóng)殘級(jí)，德國(guó)Merck公司；無(wú)水硫酸鎂、N-丙基乙二胺固相吸附劑(PSA)：上海安譜公司；試驗(yàn)用水：重蒸水。

    16種鄰苯二甲酸酯( PAEs)標(biāo)準(zhǔn)品：鄰苯二甲酸二甲酯( DMP，99.0%)、鄰苯二甲酸二乙酯( DEP，98.5%)、鄰苯二甲酸二異丁酯( DIBP，99.9%)、鄰苯二甲酸二丁酯( DBP，99.6%)、鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯(DMEP，97.7%)、鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯(BMPP，98.2%)、鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯(DEEP，98.0%)、鄰苯二甲酸二戊酯( DPP，96.2%)、鄰苯二甲酸二己酯( DHXP，98.O%)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯( BBP，99.0%)、鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯( DBEP，96.0%)、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP，99.9%)、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯(DEHP．99.6%)，鄰苯二甲酸二苯酯( Diphenyl phthalate，98.0%)、鄰苯二甲酸二正辛酯( DNOP，95.0%)、鄰苯二甲酸二壬酯( DNP，98.2%)：德國(guó)Dr.EhrenstorferGmbH公司。

    混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取上述各種標(biāo)準(zhǔn)品（準(zhǔn)確至0.01 mg），用正己烷配制成1 000 mg/L的儲(chǔ)備液，于-20℃冰箱中避光保存。

    混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用正己烷稀釋到質(zhì)量濃度為10 mg/L的混合中間液，于-20℃冰箱中避光保存。

    混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液用實(shí)驗(yàn)室清水培養(yǎng)的豆芽提取液稀釋至質(zhì)量濃度為0.01，0.02，0.05，0.20，1.0和5.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2儀器與設(shè)備

  氣相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀：賽默飛世爾科技公司，美國(guó)，配有電子轟擊離子源( El)及TraceFind-er2.1數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；AUY220型電子分析天平：島津公司，日本；IKA MS，型旋渦混合器：IKA公司，德國(guó)；CR22GⅢ型高速冷凍離心機(jī)：日立公司，日本；移液管若干。

1.3樣品前處理

    準(zhǔn)確稱取樣品2.00 g置于10 mL玻璃離心管中，加入5.0 mL正己烷，旋渦混合器上以3 000 r/min渦旋2 min后，在4℃8 000 r/min離心5 min，吸取上清液2mL于裝有150 mg MgS04、50 mg PSA 10 mL玻璃離心管中，旋渦混合器上以3 000 r/min渦旋2 min后，在4℃8 000 r/min離心5 min，取上清液進(jìn)行GC-MS/MS分析。

1.4儀器條件

1.4.1色譜條件

    色譜柱：DB-5MS（30 m×0.25 mm×0.25  ym）石英毛細(xì)管色譜柱；進(jìn)樣口溫度：250℃；柱溫箱升溫程序：100℃保持1 min，以25oC/min速率升至225oC，保持l min，再以3。C/min的速率升至240℃，保持1min，最后以8 0C/min的速率升至280℃，保持4 min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；載氣為氦氣(He，純度≥99.999%)：恒流模式；流速：1.2 mL/min;碰撞氣：氬氣（Ar，純度≥99.999%）。

1.4.2質(zhì)譜條件

色譜與質(zhì)譜接口溫度：280℃；離子源溫度：230℃；電離方式：電子轟擊源( EI)；電離能量：70eV;溶劑延遲：3 min;檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式( MRM)，16種PAEs的總離子流圖和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)( MRM)圖見(jiàn)圖1~圖2。

2結(jié)果與討論

  整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中都不能使用塑料容器，盡量減少非樣品中鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)的引入，所用的玻璃容器洗干凈后，用重蒸水沖洗幾次，最后在丙酮中浸泡1h．200℃烘箱中烘烤2h，冷卻至室溫備用。每次試驗(yàn)盡量用新開(kāi)的或者剛開(kāi)不久的試劑做試驗(yàn)，每批試驗(yàn)都要做試劑空白，防止PAEs本底污染而造成定量不準(zhǔn)確，正己烷試劑譜圖見(jiàn)圖3。

2.1提取溶劑的選擇

  PAEs是一類弱極性的化合物，根據(jù)相似相溶的原理，用弱極性的溶劑提取能提高PEAs溶解度，比較了乙腈、正己烷、石油醚有機(jī)溶劑提取效果，石油醚回收較差，乙腈和正己烷都能滿足要求，但是乙腈提取完需要濃縮凈化后定容，乙腈沸點(diǎn)高，濃縮耗時(shí)長(zhǎng)，接觸的玻璃器皿多，所受到污染的可能性增加，綜合考慮選擇正己烷作為提取溶劑。

2.2吸附劑的選擇

    固相萃取柱凈化農(nóng)藥時(shí)，發(fā)現(xiàn)塑料萃取管對(duì)檢測(cè)PAEs含量是有影響的，其中用玻璃Florisil小柱凈化，測(cè)得PAEs峰面積最小，塑料Car/NH，小柱測(cè)得PAEs峰面積最大，但是Florisil填料在做豆芽中塑化劑檢測(cè)時(shí)，除雜效果不是特別理想。所以試驗(yàn)采取QuEChERS方法凈化，比較C18、GCB、PSA等填料的凈化效果，其中，C18和PSA對(duì)PAEs幾乎沒(méi)有吸附，PSA除雜的效果比C18好，加入150 mg MgS04能除去正己烷中的水分，也就除去水溶性的雜質(zhì)。

2.3質(zhì)譜條件的優(yōu)化

    氣相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在檢測(cè)過(guò)程中，為了保證定性和定量的準(zhǔn)確，必須對(duì)待測(cè)物的離子對(duì)（母離子和子離子）、碰撞能量、掃描時(shí)間、駐留時(shí)間及監(jiān)測(cè)反應(yīng)離子的個(gè)數(shù)等一系列氣質(zhì)條件和參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，使得達(dá)到最佳的檢測(cè)效果。試驗(yàn)在固定色譜條件下，首先質(zhì)譜儀在質(zhì)荷比為50—500范圍內(nèi)采用一級(jí)全掃描( Full Scan)，對(duì)比譜庫(kù)確定待測(cè)物的保留時(shí)間和特征離子（母離子），之后采用子離子掃描( Product Scan)方式，優(yōu)化碰撞能量(CID 5—50

eV)獲得產(chǎn)物離子，最后采用MRM模式，按保留時(shí)間劃分時(shí)間區(qū)進(jìn)行分段掃描，保證每一種組分都具有良好峰形的前提下達(dá)到了較高的靈敏度，母離子、子離子、碰撞電壓和保留時(shí)間見(jiàn)表1。

2.4基質(zhì)效應(yīng)

    純正己烷試劑和陰性樣品空白配制同一濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)面積和試劑標(biāo)準(zhǔn)的比值K表明基質(zhì)效應(yīng)情況，比值大于1是增強(qiáng)效應(yīng)，比值小于1是基質(zhì)抑制效應(yīng)，結(jié)果見(jiàn)圖4和表2。

    從表2中可以看出：鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯、鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯、鄰苯二甲酸二己酯、鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯、鄰苯二甲酸二苯酯、鄰苯二甲酸二壬酯有基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，鄰苯二甲酸二甲酯和鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)明顯，鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯、鄰苯二甲酸二戊酯、鄰苯二甲酸丁基芐基酯、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯、鄰苯二甲酸二正辛酯有基質(zhì)抑制效應(yīng)，鄰苯二甲酸二乙酯和鄰苯二甲酸二戊酯基質(zhì)抑制效應(yīng)明顯。

3方法評(píng)價(jià)

3.1線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

  將16種PAEs混合標(biāo)液用實(shí)驗(yàn)室自制的豆芽提取液作為基質(zhì)，配制質(zhì)量濃度為0.01，0.02，0.05，0.20，1.0和5.0 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰較穩(wěn)定，取其平均值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，各化合物的曲線方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見(jiàn)表3。16種PAEs最低檢出質(zhì)量濃度為0.001~0.005 mg/L，由儀器的定量濃度，乘以方法的稀釋倍數(shù)除以方法的稱樣量，方法檢出限為1.0—5.0 μg/kg，定量限為3.33—16.7 μg/k9，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)方法的指標(biāo)。

3.2回收率試驗(yàn)

  實(shí)驗(yàn)室自制豆芽添加10.0，30.0和100.0 pg/kg三個(gè)水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3和1.4提取、凈化和儀器條件測(cè)定，3個(gè)水平回收率為86.4%—105.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%~5.6%．結(jié)果見(jiàn)表4。

3.3實(shí)際樣品的測(cè)定

  對(duì)湛江市各超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和批發(fā)市場(chǎng)共100個(gè)豆芽樣品進(jìn)行16種PAEs殘留分析，發(fā)現(xiàn)樣品中DBP和DEHP殘留檢出率較高，DBP含量范圍在20.3—578.6μg/kg，DEHP含量范圍在7.3—364.6 g/kg，樣品中DBP和DEHP殘留見(jiàn)圖5。

4結(jié)論

試驗(yàn)采用QuEChERS方法結(jié)合GC-MS/MS同時(shí)測(cè)定豆芽中的16種PAEs。2.00 g樣品經(jīng)5.0 mL正己烷旋渦提取，150 mg MgS04、50 mg PSA凈化，GC-MS/MS測(cè)定，在10.0，30.0和100.0 μg/kg三個(gè)水平添加16種PAEs，回收率為86.4%—105.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%~5.6%，方法檢出限為1.0~5.0 μg/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)方法的指標(biāo)。該方法具有簡(jiǎn)單、快速、靈敏的優(yōu)點(diǎn)，串聯(lián)質(zhì)譜提供的離子對(duì)掃描能夠很大的程度上減少了假陽(yáng)性。

5摘要

 建立氣相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)，同時(shí)測(cè)定豆芽中16種鄰苯二甲酸酯(PAEs)的方法。樣品經(jīng)過(guò)正己烷提取，QuEChERS (PSA+MgSO4)凈化，GC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式測(cè)定，外標(biāo)法定量。16種PAEs的質(zhì)量濃度在0.01～5．O mg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.99,加標(biāo)回收率為86.4%- 105.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.5%-5.6%，方法定量限為3.33～16.7 μg/kg。該方法具有簡(jiǎn)單、快速、可靠的優(yōu)點(diǎn)，串聯(lián)質(zhì)譜提供的離子對(duì)掃描能夠

很大的程度上減少的基質(zhì)干擾，去除了假陽(yáng)性的干擾，適合檢測(cè)和確證豆芽中的鄰苯二甲酸酯。