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作者：張毅

    維生素C即抗壞血酸，是一種水溶性維生素，具有抗壞血病、抗感冒和提高免疫力的功能。還能促進(jìn)體內(nèi)膠原蛋白和黏多糖的合成，增加機(jī)體抵抗力，對(duì)人體健康有著重要的意義。人體因缺乏古洛糖內(nèi)酯氧化酶而不能合成自身所需的維生素C，故必須從食物中獲取。

    隨著維生素C在食品工業(yè)中廣泛應(yīng)用，食品中維生素C含量測(cè)定已成為人們關(guān)注的一個(gè)重要問(wèn)題，同時(shí)引起不少研究者重視。目前維生素C測(cè)定方法主要有滴定法、分光光度法、熒光分光光度法、電極法、薄層色譜法、高效液相色譜法等，從國(guó)內(nèi)維生素C含量測(cè)定方法使用現(xiàn)狀分析，分光光度法及熒光分光光度法仍然是維生素C含量測(cè)定的主流，如測(cè)定維生素C含量的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中，多為分光光度法及熒光法，但這2種方法測(cè)定耗時(shí)長(zhǎng)，試驗(yàn)試劑安全隱患大，同時(shí)操作過(guò)程復(fù)雜、高效液相色譜法因?yàn)椴僮骱?jiǎn)便、靈敏、可靠等特點(diǎn)得到較快的發(fā)展。但目前國(guó)標(biāo)法僅SN/T 0744-1999“出口飲料中維生素C和咖啡因檢驗(yàn)方法”中采用高效液相色譜法，且針對(duì)飲料樣品。超高效液相色譜是在普通高效液相色譜基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新一代高效液相色譜儀，它對(duì)于分離和測(cè)定有機(jī)物質(zhì)有更多的優(yōu)越性，試驗(yàn)嘗試用超高效液相色譜測(cè)定明膠糖果中的維生素C，獲得較好的效果，不僅分析時(shí)間更短、峰型更窄，靈敏度高，定量更精準(zhǔn)，而且樣品和溶劑用量少，為明膠糖果中維生素C的測(cè)定開(kāi)辟一條新的途徑。

1  材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器與設(shè)備

    UPLC: Waters H-Class；TUV紫外檢測(cè)器；Empower3軟件：Waters；超聲波儀：安譜；超純水機(jī)：ELGA。

1.1.2試劑與標(biāo)準(zhǔn)品

    草酸：AR；磷酸二氫鉀：AR；磷酸：AR；甲醇：HPLC；磷酸二氫鉀溶液：6.8 g/L，pH 2.3；維生素C標(biāo)準(zhǔn)品：≥99.9%，Dr.E。

1.1.3樣品

 明膠糖果。

1.2方法

1.2.1  維生素C標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液制備

    稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)品(≥99.9%) 0.100 0 g，用超純水定容到100 mL，搖勻，配置成1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液．4℃避光保存，可放置l周。

    將上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用超純水稀釋成維生素C含量為1，5，10，20，50和100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.2樣品的處理

    將樣品于避光條件下，用剪刀剪成盡量細(xì)小的顆粒。稱取1.0 g精確至0.000 1 g剪碎的樣品于約60 mL磷酸二氫鉀溶液中超聲提取15 min，加5 mL乙酸鋅溶液和5 mL亞鐵氰化鉀溶液，用磷酸二氫鉀溶液定容至100 mL棕色容量瓶中。靜置20 min，取上清液10 mL，用磷酸二氫鉀溶液稀釋至50 mL，過(guò)0.22 1m濾膜，待測(cè)。

1.2.3色譜條件

    色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3( 2.1mm×50 mm×1.8 μm)；流動(dòng)相：V(6.8 g/L磷酸二氫鉀溶液( 6.8 g/L，pH 2.3))：V（甲醇）=99：1，流速0.3 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，柱溫30℃，波長(zhǎng)為266 nm。

2結(jié)果與討論

2.1試驗(yàn)條件的選擇

2.1.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

    對(duì)維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液用二極管陣列檢測(cè)器在190—400 nm進(jìn)行全波長(zhǎng)紫外掃描，結(jié)果表明維生素C的最大吸收波長(zhǎng)為266 nm，故選用266 nm作為試驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

2.1.2流動(dòng)相的選擇

    試驗(yàn)分別考察3種不同的流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，1%草酸溶液一甲醇、1%磷酸溶液一甲醇、6.8 g/L磷酸二氫鉀溶液一甲醇。結(jié)果表明，使用6.8 g/L磷酸二氫鉀溶液一甲醇時(shí)，基線最平穩(wěn)，干擾峰相對(duì)較少，故最終選擇其作為流動(dòng)相。試驗(yàn)中還比較了流動(dòng)相中6.8 g/L磷酸二氫鉀溶液一甲醇的pH、比例等因素對(duì)分離效果的影響，結(jié)果表明：V(6.8 g/L磷酸二氫鉀溶液(pH2.3))：V（甲醇）=99：1時(shí)，待測(cè)物質(zhì)色譜峰峰形好且分離度高，可以準(zhǔn)確測(cè)定其峰面積，進(jìn)行定量分析。結(jié)果見(jiàn)圖1~圖3。

2.2線性范圍

分別取標(biāo)準(zhǔn)使用液，用HPLC分別測(cè)其峰面積，峰面積及線性方程、相關(guān)系數(shù)的結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3回收率試驗(yàn)

  取明膠糖果，分別在3個(gè)添加水平下的回收率結(jié)果見(jiàn)表2（樣品回收率表），3個(gè)水平下的平均回收率在87.9%—99.9%之間，RSD≤6.29%，能滿足定量檢測(cè)的要求。

2.4精密度試驗(yàn)

  準(zhǔn)確稱取明膠糖果樣品1.0 g（精確至0.000 1 g）依1.2.2處理后，平行6次測(cè)定其峰面積，保留時(shí)間基本不變。RSD分別為：RSD（tR）=0.05%，RSD (A)=6.25%。

2.5檢出限

    吸取5 hg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液10 μL重復(fù)進(jìn)樣10次測(cè)定，以3倍峰峰信噪比計(jì)算，檢出限為5 mg/kg。

3結(jié)論

    使用超高效液相分離系統(tǒng)，ACQUITY UPLC HSST3（2.1 mm×50 mm×1.8 μm）色譜柱，甲醇一磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相，紫外檢測(cè)器，可測(cè)定明膠糖果中的維生素C含量，該法線性范圍寬、相關(guān)性好、分析時(shí)間更短、峰型更窄，靈敏度高，定量更精準(zhǔn)，能更好的滿足該類產(chǎn)品中維生素C含量的測(cè)定。

  維生素C極其不穩(wěn)定，在生產(chǎn)加工、儲(chǔ)存運(yùn)輸和銷售過(guò)程中易分解，監(jiān)控此類產(chǎn)品的維生素C含量就顯得尤為重要。該方法高效快速、樣品和溶劑用量少，克服了其他方法過(guò)于復(fù)雜、耗時(shí)的缺點(diǎn)，可以作為明膠糖果中維生素C的檢測(cè)新方法。

4摘要

    建立超高效液相色譜法測(cè)定明膠糖果中維生素C含量的方法。采用超高效液相分離系統(tǒng)，超聲波萃取法，選用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 mm×50 mm×1.8 μm)色譜柱，甲醇一磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相，紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)為266 nm，峰面積外標(biāo)法定量。維生素C在0.5～100 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，其質(zhì)量濃度和峰面積有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R=0.999 91。加標(biāo)平均回收率在87.9%-99.9%之間，RSD≤6.29% (n=6)。該方法前處理簡(jiǎn)單，陳清艷

線性范圍寬、分析時(shí)間短、峰型更窄，靈敏度高，定量更精準(zhǔn)。該方法適用于明膠糖果中維生素C的測(cè)定。