91精品人妻互换日韩精品久久影视|又粗又大的网站激情文学制服91|亚州A∨无码片中文字慕鲁丝片区|jizz中国无码91麻豆精品福利|午夜成人AA婷婷五月天精品|素人AV在线国产高清不卡片|尤物精品视频影院91日韩|亚洲精品18国产精品闷骚

 馬義虔1，彭黔榮2，馮貴濤1，喬爽3，李影3，楊敏3*

  1．貴州大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院(貴陽550025)；2．貴州中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心（貴陽550009）；3．貴州大學(xué)藥學(xué)院（貴陽550025）

摘要桑椹花色苷是2-苯基苯并吡喃結(jié)構(gòu)多羥基和多甲氧基衍生物的一類水溶性糖苷，具有抗氧化、抗癌、抗肥胖和神經(jīng)保護(hù)等生物活性，可廣泛應(yīng)用于食品、藥品及化妝品行業(yè)。桑椹花色苷的抗氧化活性與其結(jié)構(gòu)和含量密切相關(guān)。對桑椹中花色苷分離及結(jié)構(gòu)鑒定的研究具有十分重要的意義。綜述近十年來國內(nèi)外桑椹花色苷分離及結(jié)構(gòu)鑒定的研究。

關(guān)鍵詞  桑椹；花色苷；分離；結(jié)構(gòu)鑒定

 桑椹( Mulberry fruit)是�？粕�屬植物的成熟聚花果。大多數(shù)種植桑椹的國家，有3個品種的桑椹：紅桑（Morus rubra），黑桑（Morus nigra）和白桑（Morus alba）。桑椹富含多種對人體有益的成分，  如：花色苷、有機(jī)酸、糖類、酚類、維生素和微量元素等。在民間醫(yī)學(xué)上，桑椹用于滋陰補(bǔ)血、生津潤燥、肝腎陰虛、眩暈耳鳴、心悸失眠、須發(fā)早白、津傷口渴、內(nèi)熱消渴和腸燥便秘等。此外，桑椹中花色苷具有多種生物活性，如：抗血栓、抗氧 比、抗菌、抗癌、抗炎、神經(jīng)保護(hù)和抗肥胖作用。但桑椹最重要的醫(yī)藥價值是抗氧化作用。

 桑椹花色苷（Anthocyanins）是2-苯基苯并吡喃(2-Phenylbenzopyrilium)結(jié)構(gòu)的一類糖苷衍生物，為植物界廣泛分布的一種水溶性色素。研究表明：花色苷的抗氧化活性隨著羥基數(shù)目的增加、糖基化程度的減少而增強(qiáng)；花色苷B環(huán)上有鄰羥基的比沒有鄰羥基的抗氧化活性強(qiáng)；B環(huán)羥基若被甲氧基取代，其抗氧化活性也相應(yīng)下降。Kahkonen等用人類低密度脂蛋白為模型，研究發(fā)現(xiàn)花色苷元的抗氧化活性為：D p=Cy>M v>P n>P g>P t（縮寫對應(yīng)的中文名見圖1），而花色苷的抗氧化活性弱于其花色苷元。

 目前，國內(nèi)關(guān)于桑椹花色苷的文獻(xiàn)綜述主要側(cè)重于提取、純化，穩(wěn)定性和藥理作用方面。就近十年來國內(nèi)外桑椹花色苷分離及結(jié)構(gòu)鑒定進(jìn)行綜述，以期為桑椹花色苷的鑒定、抗氧化活性研究和進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1  紫外一可見光譜法

 1958年，Harborne將紫外一可見光譜法應(yīng)用于花色苷結(jié)構(gòu)的初步鑒定，如：(1)花色苷在500～550nm和275 nm左右有2個最大吸收峰，則可判斷被檢測物質(zhì)是否為花色苷；  (2)相比HCl-CH3OH體系而言，花色苷在HCl-CH3CH2OH體系中紅移10 nm左右，HCl-H2O體系中藍(lán)移15 nm左右，亦可判斷為花色苷；(3)向花色苷的0.01%鹽酸-甲醇溶液中加入3～5滴

5% AICl3-CH3OH溶液，若出現(xiàn)Amax紅移，說明B環(huán)有鄰位羥基；  (4)加入3～5滴CH3ONa，若紅移且吸光度不隨時間減少，表明C4'位上有羥基，且C3位羥基形成糖苷；(5)根據(jù)A440/Aλmax比值，判斷分子內(nèi)�；�的個數(shù)和糖苷的位置；(6)根據(jù)花色苷在300～330 nm有無吸收峰，若有吸收峰，表明有�；�存在；(7)根據(jù)花色苷在440 nm處是否有肩峰，若有肩峰，說明C5位的羥基未被取代。

 胡金奎研究發(fā)現(xiàn)，樣品溶于0.01% HCI-CH3OH溶液后在528 nm處有最大吸收峰，則可判定為花色苷；向樣品溶液中滴加3～5滴AICl3后，527 nm處吸收峰發(fā)生紅移，說明桑椹花色苷B環(huán)含有鄰位酚羥基；加入CH3ONa后，樣品在527 nm處吸收峰發(fā)生明顯的紅移，說明桑椹花色苷C3位被糖苷取代。該方法能初步鑒定花色苷結(jié)構(gòu)，但是在使用過程中應(yīng)注明使用的溶劑體系。

2高效液相色譜

 HPLC是分離和鑒定酚類物質(zhì)（花色苷，黃烷醇和異黃酮等）最常用的分析技術(shù)，通常選用反相色譜柱以及乙腈／甲醇-甲酸／乙酸-水為流動相進(jìn)行酚類物質(zhì)的分離。Kamiloglu等通過HPLC-PDA分離檢測土耳其黑桑產(chǎn)品中新鮮桑椹得到4個峰，經(jīng)4種標(biāo)品的色譜圖對比可知：C3G是主要的花色苷，其中還含有C3R、P3G（天竺葵素-3-葡萄糖苷）和P3R（天竺葵素-3-蕓香糖苷）；黑桑產(chǎn)品中除桑椹果汁和桑椹糖漿外，其余6個產(chǎn)品的C3G含量達(dá)53.93%以上，且桑椹中總黃酮和酚類含量與抗氧化活性呈正相關(guān)性。

3高效液相色譜-電噴霧質(zhì)譜技術(shù)

 HPLC-MS結(jié)合了HPLC的強(qiáng)分離能力與MS的強(qiáng)鑒定能力，從而可得到化合物的保留時間、分子量及特征結(jié)構(gòu)碎片等豐富的信息，具有分析結(jié)果準(zhǔn)確、檢出限低的特點(diǎn)，廣泛用于結(jié)構(gòu)復(fù)雜花色苷的鑒定與分析。Steranut等采用Dionex C18 AcclaimR120

色譜柱( 150 mm×4.6 mm，5μm)、甲醇-三氟乙酸-水為流動相分離羅馬尼亞黑桑椹中花色苷得到3個峰，經(jīng)標(biāo)品色譜圖的對比及MS數(shù)據(jù)可推測出3個峰為C3G、C3R和P3G，其中C3G和C3R分別為總花色苷含量的64.13%～78.23%和20.24%～35.21%。Eng m ann等使用超高壓( HHP)設(shè)備在200，400和600 M Pa下處理江蘇桑椹花色苷后，采用HPLC-DAD-ESI/MS技術(shù)鑒定得到4種花色苷，其中天竺葵素-3-（香豆酰）葡萄糖苷( P13Co)和飛燕草素-3-（香豆酰）葡萄糖苷( Dp3Co)是首次被發(fā)現(xiàn)的�；�花色苷。Zhang等采用HPLC-DAD-ESI-MS/MS技術(shù)分析云南蒙自縣2個白桑品種（大十和紅果）果渣得到5種花色苷，分別為：C3G、C3R、P3G、P3R和Cy-3-sop（矢車菊素-3-槐糖苷），這與2001年Dugo等報道的相似。其中C3G和C3R為總花色苷含量的98%，經(jīng)Sephadex LH-20分離及AB-8樹脂純化后純度能達(dá)到98%以上，可被用作食品著色劑和強(qiáng)抗氧化劑。Yang小組使用乙醇／硫酸銨為雙水相體系，經(jīng)提取、分離江蘇桑椹（Morus atropurpurea Roxb）花色苷后，采用HPLC-PDA-ESI/MS/MS技術(shù)檢測得到5種花色苷，其中飛燕草素-3-蕓香糖苷、飛燕草素-3-（丙二酰）葡萄糖苷和芍藥素-3-木糖鼠李糖苷首次被報道。該小組使用雙水相萃取( ATPE)是依據(jù)物質(zhì)在兩相間的選擇性

分配進(jìn)行液-液萃取，除糖率達(dá)90%以上，且ATPE提取物的抗氧化活性強(qiáng)于傳統(tǒng)法的提取物，當(dāng)提取物質(zhì)量濃度為300 g/μm L時，ATPE提取物的DPPH清除能力達(dá)91.5%，高于傳統(tǒng)法提取物(74.0%)。相比傳統(tǒng)法而言，ATPE不會影響花色苷的成分，并能使花色苷保持較高的抗氧化活性。鄒堂斌采用HPLC-ESI/MS測定廣州越秀區(qū)桑葚（Morus atropuipurea Roxb）中

花色苷的種類，得到8種花色苷，其中矢車菊素-3-（2G-葡糖蕓香糖苷）、飛燕草素-3-蕓香糖苷-5-葡萄糖苷和矢車菊素-3，5-二葡萄糖苷在桑椹花色苷中被首次報道。

4紙色譜-高效液相色譜-電噴霧質(zhì)譜技術(shù)

 紙色譜( PC)始于20世紀(jì)40年代，是花色苷早期分析采用的經(jīng)典方法，該方法根據(jù)花色苷在不同溶劑中的比移值( Rf)和顏色對其定性分析。紙色譜成本低、分析迅速以及能對花色苷進(jìn)行初步定性，但當(dāng)樣品中的化合物較復(fù)雜時，很難對其準(zhǔn)確分析和鑒定。Hassimotto等用SPE（聚酰胺）小柱純化巴西野生桑椹（Morus nigra L．）花色苷后，使用PC( Whatman，3 mm)分離得2種單體，經(jīng)UV-Vis光譜，HPLC/DAD和ESI-MS/MS鑒定為C3G和C3R，含量

分別為總花色苷含量的71%和19%，高于栽培的桑椹品種，且類黃酮物質(zhì)（含花色苷）的抗氧化活性強(qiáng)于槲皮素和合成的抗氧化劑（如BHT）。

5  高速逆流色譜-高效液相色譜-電噴霧質(zhì)譜技術(shù)

 該技術(shù)先用HSCCC將桑椹提取物中花色苷分離成不同的餾分，再利用HPLC-ESI/MS對其定性和定量分析。HSCCC在分離制備高純度的化合物時，具有高效、快速、簡便以及為標(biāo)品的制備和擴(kuò)大化生產(chǎn)提供參考，分離花色苷使用的溶劑體系為：甲基叔丁基醚-正丁醇-乙腈-水（配以少量的三氟乙酸）。楊玲等經(jīng)Dl01樹脂純化新疆藥桑花色苷后，采用HSCCC分離花色苷得4個餾分，純度分別為99.24%，88.5%．99.9%和96%，通過C3G標(biāo)品色譜圖對比可推測出：餾分1和3可能為矢車菊素，餾分2和4可能為同一苷元，經(jīng)UV-Vis光譜、MS鑒定，確定餾分1，2，3和4分別為C3R，P3R，C3G和P3G。2014年，Sheng等使用HSCCC分離桑椹（Morus albaL）粗提取物中花色苷得到4個餾分，經(jīng)HPLC-UV、ESI-MS/MS鑒定，第1個餾分為非花色苷類混合物，第2~第4個餾分分別為矢車菊素-3-0-（6”-O-鼠李糖-葡萄糖苷）( C3R)、矢車菊素-3-0-（6”-0-鼠李糖-半乳糖苷）( C3RGa)和牽牛花素-3-葡萄糖苷(Pt3G)，3種花色苷的純度大于95%。

6  多種技術(shù)聯(lián)合使用

 2008年，Du等用Amberlite XAD-7樹脂純化杭州桑椹（Morus albaL）花色苷后，以甲基叔丁基醚一正丁醇-乙腈-水-三氟乙酸（1：3：1：5：0.001，體積比）為溶劑系統(tǒng)，采用HSCCC分離得到5個餾分．經(jīng)HPLC，ESI-MS和NMR分析確定5個餾分為5種花色苷，其中C3RGa、C3Ga（矢車菊素-3-半乳糖苷）和C7G（矢車菊素-7-葡萄糖苷）第一次被報道。該小組同時還研究了5種單體花色苷及桑椹粗提物的抗氧化活性：桑椹粗提物、C3G、C3Ga和C7G的DPPH清除能力大于C3RG和C3RGa，當(dāng)花色苷及粗提物質(zhì)量濃度達(dá)到0.40 mg/m L以上，粗提物的DPPH清除能力強(qiáng)于5種單體花色苷。Qin等采用Waters RP Cl8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm），以乙腈-三氟乙酸-水為流動相，PAD檢測器檢測陜西周至縣桑椹（MorusalbaL-）花色苷得到4個峰，經(jīng)UV-Vis光譜、LC-MS和'HNMR鑒定得到：C3G、C3R、P3G和P3R，其中C3G和C3R的含量分別為60%和38%。綜合以上研究，歸納了桑椹中花色苷的質(zhì)譜信息（如表1所示）。

7結(jié)論與展望

 桑椹花色苷作為天然植物中的一種水溶性色素，具有保健和藥理價值。對于桑椹花色苷的結(jié)構(gòu)鑒定已從UV-Vis光譜發(fā)展到多種技術(shù)的聯(lián)合使用。NMR在對花色苷中糖苷同分異構(gòu)體和�；�化位點(diǎn)的確定具有優(yōu)勢，而HSCCC的使用則能使桑椹提取物中花色苷分離成高純度的單體。Morus atropurpurea Roxb品種中花色苷的種類多達(dá)8種；黑桑椹(Morus nigraL．)和白桑椹（Morus albaL．）中主要的花色苷為C3G和C3R(含量分別為總花色苷的53.94%～78.23%和19%～43.83%)，且C3G和C3R的抗氧化活性強(qiáng)于其他花色苷，這與花色苷的結(jié)構(gòu)和含量有密切的關(guān)系。由以上結(jié)果可見，桑椹中花色苷的種類和含量與桑椹品種、栽培地的氣候、土壤及桑樹的修剪、病蟲害防治等因素有關(guān)。上述鑒定結(jié)果，為了解各種桑椹含有花

色苷的種類和結(jié)構(gòu)提供了試驗數(shù)據(jù)，為桑椹花色苷資源的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。

 隨著人們對天然花色苷需求量的增大，花色苷的分離制備也成為了目前國內(nèi)外研究學(xué)者的重點(diǎn)，相比半制備型HPLC、PC、離子交換樹脂、凝膠樹脂和大孑L樹脂等單獨(dú)使用或聯(lián)用而言，HSCCC分離制備高純度單體花色苷更具有高效、簡便和省時等特點(diǎn)。近十年來，HSCCC在制備高純度天然產(chǎn)物方面已從毫克量級制備到了克量級，這對于高純度樣品的制備顯示出很好的優(yōu)勢。雖然花色苷的分離制備得到發(fā)展，但對于桑椹中花色苷與抗氧化活性作用的機(jī)理有待深入的研究，這將有助于花色苷在食品、藥品及保健品行業(yè)中發(fā)揮巨大的作用。